基于Small interfering RNA（siRNA）的RNA干擾（RNA interference, RNAi）策略已經(jīng)成為生物醫(yī)學(xué)研究的常規(guī)手段,而通常采用的基于聚陽(yáng)離子或陽(yáng)離子磷脂的siRNA遞送系統(tǒng)遞送效率低、細(xì)胞毒性高,而且缺少示蹤功能,嚴(yán)重制約了siRNA藥物臨床轉(zhuǎn)化。為克服傳統(tǒng)siRNA遞送載體的不足,本研究發(fā)展了一種新型siRNA熒光納米遞送系統(tǒng)。首先利用牛血清白蛋白為模板,通過(guò)生物礦化策略合成具有近紅外熒光發(fā)射的金納米簇（Gold nanocluster, GN）,利用乙二胺（Ethylenediamine, EDA）或N,N-二甲基乙二胺（N,N’-Dimethylethylenediamine, DMA）對(duì)GN進(jìn)行共價(jià)修飾,得到陽(yáng)離子化金納米簇（Cationic gold nanocluster, CGN）,同時(shí)實(shí)現(xiàn)siRNA高效遞送和熒光示蹤。然后,以表達(dá)綠色熒光蛋白（Green fluorescence protein, GFP）的肺癌A549細(xì)胞（A549-GFP）為細(xì)胞模型,驗(yàn)證了CGN可實(shí)現(xiàn)siRNA高效遞送,并沉默A549-GFP細(xì)胞的GFP表達(dá)... 

【文章來(lái)源】：分析化學(xué). 2020,48(06)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

GN、DMA-GN和EDA-GN的凝膠電泳圖

GN、DMA-GN和EDA-GN的細(xì)胞毒性

蛋白質(zhì)保護(hù)的GN生物相容性良好, 熒光性質(zhì)穩(wěn)定, 熒光發(fā)射波長(zhǎng)可調(diào), 而且可發(fā)射近紅外熒光[39,40]。基于此, 本研究利用BSA生物礦化合成的GN進(jìn)行陽(yáng)離子化修飾, 并用作siRNA的遞送載體。陽(yáng)離子化的GN(DMA/EDA-GN)的制備過(guò)程及對(duì)siRNA的遞送原理如圖1所示。在堿性條件下, 以BSA為模板時(shí), HAuCl4被還原, 合成可發(fā)射近紅外熒光的GN[27]。在EDC/NHS的活化作用下, EDA或DMA能與GN表面BSA上的谷氨酸等殘基反應(yīng), 使BSA-GN陽(yáng)離子化。siRNA呈負(fù)電性, 即可通過(guò)靜電作用吸附在CGN表面, 從而實(shí)現(xiàn)對(duì)siRNA的有效負(fù)載。負(fù)載了siRNA的納米復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞后, 細(xì)胞內(nèi)的酸性pH環(huán)境使EDA或DMA上的胺基質(zhì)子化, 產(chǎn)生“質(zhì)子海綿”效應(yīng)[34～37], 破環(huán)內(nèi)涵體, 釋放siRNA, 有效沉默靶基因。3.2 DMA/EDA-GN復(fù)合物的表征


本文編號(hào)：3072744