納米載體攜載化療藥物用于抗腫瘤是目前腫瘤治療研究中的熱點。納米載體用于腫瘤治療有許多的優(yōu)點,它不僅可以對水溶性較差的化療藥物起到很好的增溶效果,同時通過接枝靶向基團和具有刺激響應性化學鍵,能使抗腫瘤納米載體實現(xiàn)藥物靶向傳遞的同時也能使藥物在腫瘤細胞內(nèi)可控釋放。傳統(tǒng)的納米載體往往只具有單一的刺激響應性或者單一的靶向效果,而體內(nèi)真實的環(huán)境相對復雜,單一的刺激響應往往不能使納米顆粒在進入腫瘤細胞后快速地響應細胞內(nèi)或者外加的刺激,故無法實現(xiàn)藥物快速釋放。同時,隨著抗腫瘤研究的深入,納米靶向載體的研究也逐漸地從靶向細胞層面向細胞器層面深入。本論文旨在構(gòu)建多靶向及多刺激響應的聚合物納米載體,并考察其相關性能,體外釋放藥物以及體外和體內(nèi)抗腫瘤效果。本論文第二章,我們采用具有二硫鍵的單保護胱胺開環(huán)聚合己內(nèi)酯,將二硫鍵高效地引入到高分子聚合物中,避免了傳統(tǒng)接枝響應基團接枝率不高的問題。之后通過縮合反應,成功合成了具有PBA靶向的PEG-SS-PCL,抗腫瘤藥物DOX則通過酸不穩(wěn)定腙鍵鏈接在兩親性高分子的疏水端。體外藥物釋放實驗表明,膠束在雙重刺激條件下,膠束結(jié)構(gòu)的變化最終導致了藥物的快速釋放。通過激光共聚焦顯微鏡觀察,具有靶向雙響應的膠束能更多地被腫瘤細胞所內(nèi)吞,進入細胞之后,在細胞內(nèi)pH刺激和GSH刺激下,藥物能快速地從膠束中釋放。空白材料對正常細胞和腫瘤細胞都幾乎無毒,而載藥膠束中,具有靶向和雙響應的PBA-PEG-SS-PCL-hyd-DOX膠束在靶向作用和雙響應刺激下,具有最好的抗腫瘤效果。最后,通過荷H22腫瘤小鼠的體內(nèi)抗腫瘤實驗中,進一步的說明PBA-PEG-SS-PCL-hyd-DOX膠束能更好地靶向腫瘤組織,取得了最好的抗腫瘤效果。組織學層面,通過HE染色和TUNEL染色,表明了空白材料對腫瘤細胞無殺害,而PBA-PEG-SS-PCL-hyd-DOX膠束則具有最好的抗腫瘤效果。在論文第三章,我們設計出了能逐步響應環(huán)境刺激,同時協(xié)同了化療和光動力治療的刺激響應型納米膠束。DLS結(jié)果顯示膠束在酸性環(huán)境和還原性環(huán)境下,膠束粒徑有所變化。高效液相色譜(HPLC)結(jié)果進一步證實,膠束在酸性環(huán)境,首先斷裂出前藥小分子PBA-SS-CPT,之后在GSH刺激下,進一步轉(zhuǎn)化成CPT。細胞吞噬實驗中,細胞流式結(jié)果顯示原卟啉能通過光化學內(nèi)在化作用增強膠束的內(nèi)吞。載藥膠束的細胞毒性實驗顯示,由于光敏劑PpIX的存在,光照會增加Dex-g-PpIX-g-PBA-SS-CPT(DPPSC)膠束的細胞毒性,同時,由于膠束逐步地響應細胞內(nèi)外的環(huán)境,導致了藥物的高效釋放,從而導致了細胞毒性的增加。短時的光照能促進整個膠束逃逸溶酶體,同時,由于溶酶體內(nèi)的酸性環(huán)境,PBA-SS-CPT能很好的從膠束中脫落,然后進入細胞質(zhì)。利用了多種共定位分析方法對細胞的CLSM圖進行定量和定性分析,結(jié)果表明DPPSC膠束在細胞中逐步響應釋放藥物。進一步通過HPLC檢測,定性和定量的驗證了 PBA-SS-CPT在細胞質(zhì)中能更好的轉(zhuǎn)化成CPT。用膠束和裸藥進行荷PANC-1腫瘤裸鼠治療后,DPPSC膠束組在2種不同策略光照下,小鼠腫瘤生長最慢,小鼠體重變化不大,并且整組小鼠存活時間最長。治療末期取出小鼠腫瘤做組織學切片。通過HE染色和TUNEL染色證明了材料的安全性以及DPPSC膠束組在2種策略光照下,腫瘤細胞凋亡最明顯,從組織學層面說明了 DPPSC膠束的藥效。在論文最后一章,成功合成出以四氧化三鐵作磁靶向,三苯基膦陽離子(TPP)作為線粒體靶向,DOX作為化療藥物結(jié)合聚多巴胺(PDA)熱療的納米顆粒。近紅外成像結(jié)果顯示,包裹多巴胺的顆粒,在光照6分鐘后,溫度快速的升高了 18度以上。DOX的釋藥實驗表明,酸性條件下DOX的釋放快于中性條件,同時,NIR光照下,DOX的釋放明顯加快。細胞相容性實驗結(jié)果表明,空白材料對細胞無毒性,但在NIR光照射條件下,材料的細胞毒性增加,由于二硫鍵的斷裂,TPP靶向線粒體,促使對熱敏感的腫瘤細胞線粒體的破壞,加速了腫瘤細胞的凋亡,因此Fe3O4@PDA-TPP/-SS-mPEG和Fe3O4@PDA-TPP/-mPEG的細胞毒性出現(xiàn)顯著差異。與此同時,通過活死細胞熒光染色也能觀察到,只有光照區(qū)域的細胞才會死亡。細胞CLSM圖顯示只有二硫鍵連接的mPEG才能從納米顆粒上掉落下來,從而暴露出TPP靶向單元,進而靶向線粒體,熒光的共定位分析結(jié)果也進一步說明了這一點。動物實驗結(jié)果顯示,在光照情況下,雙靶向光熱療結(jié)合化療組小鼠腫瘤增長最緩慢,小鼠體重無明顯變化,并且小鼠存活率最高,說明該顆粒更好地抑制腫瘤增長同時具有高的安全性。
【學位單位】：西南交通大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：TQ460.1;TB383.1
【部分圖文】：

ＤＯＸ部分釋放。之后，膠束進一步進入細胞質(zhì)，在細胞質(zhì)中過量ＧＳＨ刺激下，逡逑膠束中二硫鍵斷裂，膠束徹底解體，藥物快速釋放。釋放的ＤＯＸ擴散進入細胞逡逑核并殺滅腫瘤細胞（圖１．２）。Ｌｉ等采用一鍋法制備了苯丙氨酸二肽為基礎，天逡逑然海藻酸二醛作為交聯(lián)劑誘導苯丙氨酸二肽自組裝并原位還原金離子成金納米逡逑顆粒的雜化納米球。該雜化納米球在細胞內(nèi)的ｐＨ和ＧＳＨ刺激下，能快速的解體逡逑成小顆粒，進而藥物在細胞中快速釋放，達到殺滅腫瘤的目的。Ｌｖ等開發(fā)了逡逑一種新型接枝紫杉醇的高分子前藥，該前藥以二硫代二丙酸為側(cè)鏈鏈接劑通過逡逑酯鍵鏈接藥物和主鏈高分子，因此該高分子前藥同時具有ｐＨ和ＧＳＨ刺激釋藥。逡逑Ｗａｎｇ等［５６］為了增加腫瘤細胞的內(nèi)在化以及細胞內(nèi)的藥物快速釋藥，制備了ｐＨ逡逑和ＧＳＨ雙重刺激響應的聚合物脂質(zhì)體囊泡

￣邐＾＊＾９＊邋Ｌ邋（ｇ＾邋ｔ）逡逑圖１．３邋ＰＢＡ－ＰＥＧ－ＳＳ－ＰＣＬ－ｈｙｄ－ＤＯＸ膠束靶向基團介導的內(nèi)吞以及膠束在細胞內(nèi)逡逑的刺激響應釋藥的示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．３邋ＰＢＡ邋Ｌｉｇａｎｄ－Ｍｅｄｉａｔｅｄ邋Ｅｎｄｏｃｙｔｏｓｉｓ邋ｏｆ邋ＰＢＡ－ＰＥＧ－ＳＳ－ＰＣＬ－ｈｙｄ－ＤＯＸ逡逑Ｐｏｌｙｍｅｒ邋Ｍｉｃｅｌｌｅｓ邋ａｎｄ邋Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ，邋Ｐｒｏｍｐｔ邋Ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ邋Ｄｒｕｇ邋Ｒｅｌｅａｓｅ邋Ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ邋ｂｙ逡逑ＧＳＨ邋ａｎｄ邋ｔｈｅ邋Ａｃｉｄｉｃ邋Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ逡逑（２）制備了以化療藥物ＣＰＴ和光敏劑ＰｐＩＸ為疏水端，葡聚糖Ｄｅｘ做親水端的復逡逑合膠束。該膠束可以逐步響應腫瘤細胞的亞細胞微環(huán)境，同時聯(lián)合了光動力治療逡逑和化療（圖１．４）。系統(tǒng)研宄了該體系的逐步響應行為、生物相容性、光化學內(nèi)在逡逑化、細胞毒性、光動力產(chǎn)生活性氧、并進行了體內(nèi)抗腫瘤活性研宄。逡逑Ｓｈｏｒｔ邋ｌｉｇｈｔ邋＊，Ｌｏｎｇ邋ｌｉｇｈｔ邐ｒ逡逑ｖｉａｔｉｏｎ邐ＩＶ0ｅａｔｈ逡逑？r>＾邐＇NB逡逑氣里、Ｔ邋ｔ：逡逑Ｅｎｄｏ／Ｌｙｓｏｓｏｍｅ邋＾逡逑圖１．４膠束程序性釋放藥物用于增強藥物的化療和光動力治療的示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．４邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｇｒ

（２）制備了以化療藥物ＣＰＴ和光敏劑ＰｐＩＸ為疏水端，葡聚糖Ｄｅｘ做親水端的復逡逑合膠束。該膠束可以逐步響應腫瘤細胞的亞細胞微環(huán)境，同時聯(lián)合了光動力治療逡逑和化療（圖１．４）。系統(tǒng)研宄了該體系的逐步響應行為、生物相容性、光化學內(nèi)在逡逑化、細胞毒性、光動力產(chǎn)生活性氧、并進行了體內(nèi)抗腫瘤活性研宄。逡逑Ｓｈｏｒｔ邋ｌｉｇｈｔ邋＊，Ｌｏｎｇ邋ｌｉｇｈｔ邐ｒ逡逑ｖｉａｔｉｏｎ邐ＩＶ0ｅａｔｈ逡逑？r>＾邐＇NB逡逑氣里、Ｔ邋ｔ：逡逑Ｅｎｄｏ／Ｌｙｓｏｓｏｍｅ邋＾逡逑圖１．４膠束程序性釋放藥物用于增強藥物的化療和光動力治療的示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．４邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ邋ｒｅｌｅａｓｅ邋ｆｏｒ邋ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ邋ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ邋ａｎｄ逡逑ＰＤＴ．逡逑

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉炬;郭強;張軍;吳詩坡;董大勇;李亮亮;付玲;徐俊杰;陳薇;;利用細胞毒性實驗檢測血液中炭疽毒素致死因子的方法學研究[J];軍事醫(yī)學;2013年05期

2 黃雪蓮;范國書;李繼遙;;常用細胞毒性實驗在口腔局部用藥安全性評價中的應用[J];國際口腔醫(yī)學雜志;2009年04期

3 杜文鵬;牙科充填材料細胞毒性實驗體外模型研究進展[J];天津醫(yī)科大學學報;2004年01期

4 張雷;孫英明;全紅;謝叢華;;半胱胺修飾的FePt納米顆粒對HeLa細胞的毒性[J];武漢大學學報(理學版);2017年06期

5 楊慧;李繼喜;;重新認識細胞焦亡[J];科學;2018年03期

6 林祥梅;王建峰;賈廣樂;梅林;王眾;;三聚氰胺的毒性研究[J];毒理學雜志;2008年03期

7 劉衛(wèi);鄧淑鳳;齊麗榮;孫曉麗;宋輝;李新偉;;柳葉洗眼液毒理學實驗研究[J];臨床合理用藥雜志;2012年14期

8 王昕;朱雪濤;施燕平;;醫(yī)用透明質(zhì)酸鈉的細胞毒性實驗[J];食品與藥品;2006年02期

9 梁偉潮;蔣澤生;汪燕;鐘利民;潘明新;;新西蘭雌-雄兔皮膚移植模型體內(nèi)細胞毒性實驗[J];中國組織工程研究;2012年05期

10 曾麗海;黃振烈;楊杏芬;葛怡琛;殷霄;賴關朝;;中性紅攝取實驗預測化學品急性毒性研究[J];中國職業(yè)醫(yī)學;2014年06期

相關會議論文 前3條

1 祖麗皮也·阿不力克;古麗加瑪麗·阿不力克;朱慶豐;陳彤;易楊華;王少海;;四種脫細胞魚皮基質(zhì)材料的制備及體外細胞毒性研究[A];第十一次全國口腔修復學學術會議論文匯編[C];2017年

2 張?zhí)炝?韓曉英;程東;;一種醫(yī)用消毒耦合劑細胞毒性實驗[A];中國毒理學會第六屆全國毒理學大會論文摘要[C];2013年

3 滕堯樹;;從“魏則西”事件探討EpCAM-CAR-γδT細胞在頭頸鱗狀細胞癌治療中的殺傷作用[A];2016年浙江省醫(yī)學會耳鼻咽喉頭頸外科學學術年會論文匯編[C];2016年

相關博士學位論文 前2條

1 王毅;多重刺激響應型聚合物納米顆粒在癌癥治療中的研究[D];西南交通大學;2018年

2 胡海梅;半乳糖—聚乙二醇—聚-L-賴氨酸/質(zhì)粒pEGFP-C1復合物納米膠束的制備和性能研究[D];中山大學;2006年

相關碩士學位論文 前9條

1 宋小哲;新型骨植入Mg-Zn-Y-Nd-Zr合金的體外降解性能與生物相容性研究[D];鄭州大學;2017年

2 蘇淮;甘草酸、甘草次酸對P-糖蛋白功能及其表達的研究[D];南京師范大學;2012年

3 田慧慧;聚乙烯亞胺/透明質(zhì)酸聚電解質(zhì)載體的構(gòu)建及基因、藥物共傳遞癌癥治療研究[D];江南大學;2017年

4 張倩;聚集誘導發(fā)光有機小分子的設計及其生物應用[D];南京郵電大學;2017年

5 梁偉潮;新西蘭雌—雄兔皮膚移植模型供體特異性體內(nèi)細胞毒性試驗方法的建立[D];南方醫(yī)科大學;2012年

6 曹秀香;生物醫(yī)用氧化鎂納米粒子/左旋聚乳酸復合材料的制備及性能[D];天津理工大學;2014年

7 楊慧慧;異甘草素與二苯并Tk噸類化合物體外抗腫瘤及其機制研究[D];廣東藥科大學;2017年

8 孫姣姣;金屬硫族半導體量子點的合成及細胞活性研究[D];河南師范大學;2017年

9 白楊;共載阿霉素和miR-122的納米體系聯(lián)合治療肝癌的研究[D];天津醫(yī)科大學;2017年

本文編號：2827132