【摘要】：目的：2000年6月,我時年61歲公教人員退休時,滿懷想過退休安閑自在的生活。沒想到第二年常覺得胸悶心悸現(xiàn)象,經(jīng)長庚醫(yī)院心臟內(nèi)科診斷為冠心病,同年11月作心臟搭橋手術,從此長期服用降血壓藥氯沙坦、預防狹心癥發(fā)作藥消心痛、防心肌梗塞及血栓塞癥藥阿司匹林等西藥,雖心臟恢復功能,但腎功能逐年下降,且并發(fā)了高尿酸血癥、痛風、糖尿病及輸尿管結石等病證。想起父親為中醫(yī)師,擬以中藥調(diào)理治療,副作用較少,故2010年9月考入廣州中醫(yī)藥大學學中醫(yī)。在2013年9月份博士班就讀時痛風發(fā)作,以吳同學的痛風經(jīng)驗方,服后疼痛稍為緩解。又見近來國內(nèi)經(jīng)濟繁榮,生活水平提升,飲食文化受西式速食文化的沖擊,攝取高嘌呤、高蛋白等物質(zhì)引起高尿酸血癥及痛風,且患者年齡層逐年下降之隱憂。有鑒于此,擬“五苓痛風丸對高尿酸血癥及痛風療效的實驗與臨床研究”為課題。在梳整中國歷代古籍文獻,自《黃帝內(nèi)經(jīng)·靈樞》稱痛風為賊風、痹證、歷節(jié)等病名至金元時代,統(tǒng)合痛風病名、癥狀、證型、論治及方藥,屬于中醫(yī)痹證范疇。幾千年流傳后世經(jīng)方,歷經(jīng)時代大臨床驗證其療效,此為中醫(yī)藥治療優(yōu)勢。為驗證其效力,特以中藥濃縮劑及中藥顆粒劑,以五苓痛風丸對高尿酸血癥及痛風療效動物實驗與臨床實驗之研究,整理中醫(yī)藥治療痛風的文獻,探討五苓痛風丸治療高尿酸血癥和痛風的療效及相關機理。方法：1文獻研究：本研究方法主要采取探討中醫(yī)古藉,歷史縱向與相關痹證、賊風、歷節(jié)、痛風疾病作為橫向,縱橫探討加以歸納整理,梳理歷代醫(yī)者關于痛風的病機描述和辨證論治及方藥。2.動物實驗：(1)大鼠急性痛風性關節(jié)炎造模方法,取60只Wistar雄性大鼠(200±20g),稱重后隨機分成空白組、模型組、陽性組(扶他林0.39mg/ml)、中藥高、中、低劑量組等6組。中藥各劑量組于造模前3天連續(xù)ig給藥；陽性組于造模前2天連續(xù)ig給藥。除空白組外其余均將0.2ml尿酸鈉溶液注入到踝關節(jié)腔,形成急性痛風性關節(jié)炎模型。(2)細胞實驗：①造模方法：摸索尿酸鹽的造模濃度和造模時間：培養(yǎng)大鼠原代滑膜細胞,培養(yǎng)基中加入高中低(700,1000,l,400uM)三種濃度的尿酸鹽,檢測滑膜細胞內(nèi)VCAM-1的表達,。②“五苓痛風丸”含藥血清的制備：A.摸索中藥的給藥濃度和給藥時間,檢測VCAM-1水平,PCR或WB。B.培養(yǎng)大鼠原代滑膜細胞造模及細胞分組。3.臨床實驗：(1)病例來源于2015年10月至2016年01月就診于廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院腎病科門診患者18例及深圳市吳邱保西醫(yī)內(nèi)科診所患者12例并依照隨機取樣,共30例,以患者前后服用中西藥為對照研究。(2)治療方法：①飲食療法。②中醫(yī)治療：采用“五苓痛風丸”。A.主要組成：茵陳五苓散及上中下通用痛風丸合成復方加減。B.服法：急性痛風發(fā)作時,每日28克,分二次服/或14g bid,每次用熱開水約100毫升沖溶,飯前一小時口服。③西藥治療：服用A.苯溴馬隆、B.別嘌呤醇片、C.碳酸氫鈉片、D.秋水仙堿片等治療。內(nèi)容：1動物實驗內(nèi)容：“五苓痛風丸”對急性痛風性關節(jié)炎大鼠模型的作用研究：(1)造模時間：于2015年5月5日-2015年5月19日。(2)造模方法：取60只Wistar雄性大鼠(200士20g),實驗分6組,每組5只大鼠。①空白組及②模型組：各以生理鹽水灌胃,每天1次,共5天。③扶他林組：以雙氯芬酸鈉混懸液(0.39mg/ml)灌胃,每天1次,共5天。④中藥高劑量組：以中藥濃縮劑五苓痛風丸高濃度28g溶液灌胃,每天1次,共5天。⑤中藥中劑量組：以中藥濃縮劑五苓痛風丸中濃度20g溶液灌胃,每天1次,共5天。⑥中藥低劑量組：以中藥濃縮劑五苓痛風丸低濃度12g溶液灌胃,每天1次,共5天。,除空白組外其余5組均造模,注入尿酸鈉結晶溶液,誘導急性關節(jié)模型,空白組注入相同體積的生理鹽水。第5天灌胃后24h取材并處死大鼠2臨床研究內(nèi)容：由高尿酸血癥而引發(fā)的急性痛風性關節(jié)炎是痛風的前驅(qū)癥狀。起病急驟,多首發(fā)于足拇趾的跖關節(jié),其他受累部位依次為踝、跟、膝、腕、指、肘等關節(jié)。常有多種誘因：如飽餐、進食高嘌呤食物、飲酒、勞累、受冷、感染等。發(fā)作可數(shù)小時、數(shù)天或數(shù)周,緩解期可數(shù)月甚至終生。由于痛風反復發(fā)作,導致向慢性病程轉化。其治療方法,降低血尿酸,緩解急性期的癥狀、減少急性復發(fā)。西醫(yī)的治療以治標為主,雖消炎止痛消腫見效快,但副作用大。中醫(yī)治療痛風標本兼治為本,副作用少,中醫(yī)治療痛風已逐漸顯著優(yōu)勢。3高尿酸血癥診斷標準：據(jù)國內(nèi)資料正常值男性血尿酸150-380μ mol/L(2.4-6.4mg /dl),女性絕經(jīng)前尿酸為100-300μ mol/L (1.6-5.2mg/dl),而女性絕經(jīng)后接近正常男性尿酸水平。故任何原因引起尿酸生成增加或排泄少,導致血尿酸濃度升高男性和絕經(jīng)后女性的血尿酸濃度為大於380μ mol/L (6.4mg/dl)以上,女性絕經(jīng)前大於300μ mol/L (5.2mg/dl)以上可診斷為高尿酸血癥。4急性痛風性關節(jié)炎分類標準：根據(jù)1977年美國風濕病學會(ACR)訂定的《急性痛風關節(jié)炎診斷參考標準。5慢性腎臟病(CKD)診斷標準：我國對慢性腎功能不全的分為5期：即1期正常(已有腎病)、2期代償期、3期失代償期、4期腎衰竭期、5期尿毒癥期。6中醫(yī)診斷標準：參照1994年國家中醫(yī)藥管理局所發(fā)布,中華人民共和國中醫(yī)藥行業(yè)標準,《中醫(yī)病證診斷療效標準》ZY/T001.1—94中醫(yī)內(nèi)科痛風病證診斷療效標準。7臨床實驗倫理規(guī)范等規(guī)范標準。結果：1動物實驗結果：(1)五苓痛風丸對急性痛風性關節(jié)炎大鼠模型的作用機理研究：首先造模,結果發(fā)現(xiàn)：中藥高劑量組與扶他林組能夠一定程度上降低關節(jié)功能障礙指數(shù)；中藥組的關節(jié)炎癥指數(shù)高于扶他林組,低于模型組,24h和72h效果較明顯；24h和72h后,中藥組的關節(jié)腫脹率低于扶他林組,也低于模型組。然后,通過觀察關節(jié)滑膜組織病理形態(tài)學的改變,發(fā)現(xiàn)中藥組能一定程度上減少炎性細胞浸潤,吞噬細胞增生和組織紊亂等。最后,通過免疫組織化學和Elisa實驗發(fā)現(xiàn),中藥組的NF K B p65、 VCAM1和IL-1β均發(fā)生不同程度的下調(diào)表達,且呈現(xiàn)劑量效應,即中藥組劑量越高,則其效能越高。說明中藥對急性痛風性關節(jié)炎具有一定治療效果,且我們推測其是通過核轉錄因子NF κ B信號通路發(fā)揮作用。(2)五苓痛風丸對尿酸鹽誘導的痛風性關節(jié)炎的細胞模型的作用機理研究：通過細胞實驗：首先構建痛風性關節(jié)炎的細胞模型,通過qRT-PCR實驗檢測ICAM-I的表達,來摸索尿酸鹽的造模濃度和造模時間,選擇細胞狀態(tài)最佳的24h為最佳時間,選擇中藥濃度1,000μM為最佳濃度(炎性因子大量產(chǎn)生時間為24h左右最佳)。其次,摸索中藥的給藥濃度,qRT-PCR實驗檢測ICAM-I的表達,發(fā)現(xiàn)隨著濃度的增加,ICAM-I隨之下降,具有劑量效應,故選擇效果最好的高劑量組。隨后,為了驗證是否通過NF κB信號通路發(fā)揮作用,我們將NF κBp65進行siRNA干擾,下調(diào)其表達(通過qRT-PCR和WB實驗篩選獲得有效siRNA).最后,經(jīng)WB和Elisa實驗結果顯示,NF K Bp65下調(diào)后, NF κ B p65、VCAM1和IL-1β表達均發(fā)生下調(diào),且效果與中藥組相差無幾,由此推測中藥確實是通過下調(diào)NF κ B的表達,進而影響VCAM1和IL-1β表達而發(fā)揮作用。2臨床研究結果：(1)參照《臨床疾病診斷依據(jù)治愈好轉的標準》2002版中的有關內(nèi)容,結合高尿酸血癥臨床實際,擬定療效標準。顯效數(shù)占40%；有效數(shù)占33.3%；無效數(shù)占26.7%；總有效率占73.3%。(2)治療前后腎功能及血尿酸比較,經(jīng)五苓痛風丸治療后,治療前血尿酸528.8±69.9,治療后平均尿酸下降為435.6±78.0,且經(jīng)過統(tǒng)計分析二者差異是有統(tǒng)計學意義(P0.05),說明五苓痛風丸對降尿酸明顯有療效。(3)至于腎小球濾過率(eGFR),治療前平均eGFR為68.93±17.22,治療后平均eGFR為77.09±20.75似乎表示治療后能有改善,但經(jīng)過統(tǒng)計檢測后發(fā)現(xiàn)二者差異無統(tǒng)計學意義P0.05),此表明五苓痛風丸對腎功能無害。也可能對尿酸治療并非通過改善腎功能為標的。結論：本論文中藥濃縮劑-五苓痛風丸對治療高尿酸血癥及痛風關節(jié)炎,經(jīng)動物實驗、細胞實驗、臨床研究及統(tǒng)計分析結果：(1)五苓痛風丸高劑量組腫脹率低于造模組,表明治療有效,同時五苓痛風丸低、中劑量與扶他林組造模組腫脹率差異均未顯示統(tǒng)計意義,表明五苓痛風丸治療效果與扶他林組相當。加大劑量、效果更優(yōu)于造模組與扶他林組。(2)五苓痛風丸經(jīng)實驗,對動物具有一定抗炎作用,并對痛風性關節(jié)腫脹顯著抑制效力。(3)對細胞實驗,五苓痛風丸,能降低對大鼠痛風性關節(jié)炎之病變局部炎性白細胞、滑模浸潤及增生。(4)根據(jù)實驗說明：五苓痛風丸對尿酸鹽誘導的痛風性關節(jié)炎,具有一定治療效果,能夠減輕炎性反應,由整個實驗證明推測,是經(jīng)過核因子轉錄因子NFκ Bp65信號通路發(fā)揮抑制作用。(5)本課題經(jīng)過五苓痛風丸對急性痛風性關節(jié)炎影響實驗,證明其具有抗炎作用,也探討了其部分機理,因此其實驗結果,足以作為臨床提供了有力的理論基礎。(6)中藥五苓痛風丸,長遠的看是標本兼治,藥效持久性,副作用少,除治療主癥痛風外,對其伴隨癥比較全面性的改善。(7)臨床研究結論：五苓痛風丸對痛風性關節(jié)炎有一定的臨床療效,其機制與降低血尿酸和抗炎相關。
【圖文】：

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造模及指標檢測
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285

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本文編號：2557958