本文選題：血清 + microRNA　； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景肺癌是全世界發(fā)病率和死亡率最高的腫瘤。據(jù)統(tǒng)計(jì),一半的肺癌患者在確診肺癌時(shí)已發(fā)生了遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,基本失去了接受根治性治療的機(jī)會,中位生存期僅有8-11個(gè)月。其中,肺癌中85%的病例為非小細(xì)胞肺癌,非小細(xì)胞肺癌又以腺癌和鱗癌兩類為主。截至目前為止,還未有一種準(zhǔn)確可靠、經(jīng)濟(jì)便捷和創(chuàng)傷性小的方法應(yīng)用于早期非小細(xì)胞肺癌患者的診斷。miRNA為一類長度約19-24個(gè)核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA,大量的文獻(xiàn)證實(shí)其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)相關(guān)。自從miRNA被首次在循環(huán)系統(tǒng)中檢測到以來,其已被證實(shí)能夠穩(wěn)定地存在于血清中,而且可能作為一種無創(chuàng)性的生物標(biāo)志物應(yīng)用于腫瘤早期診斷。目的試圖找到潛在的可用于非小細(xì)胞肺癌早期診斷的血清miRNA生物標(biāo)志物。材料與方法本實(shí)驗(yàn)研究主要分為三部分進(jìn)行。在第一部分實(shí)驗(yàn)中,我們選取了 6例早期非小細(xì)胞肺癌患者和6例年齡與性別相匹配的健康人,提取其中的血清總RNA,采用丹麥Exiqon公司的miRCURYTM LNA Array篩選出早期非小細(xì)胞肺癌患者相對于健康人的差異性miRNAs表達(dá)譜,同時(shí)利用生物信息學(xué)的方法進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘獲得組織或血清樣本中非小細(xì)胞肺癌相關(guān)的差異表達(dá)miRNAs,最后將兩部分結(jié)果取交集初步篩選出差異表達(dá)的血清miRNAs;在第二部分實(shí)驗(yàn)中,我們選取了 12例早期非小細(xì)胞肺癌患者和12例年齡、性別相匹配的健康人,一共24例病例作為訓(xùn)練集進(jìn)行初步驗(yàn)證。同樣地,提取其中的血清總RNA,然后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對第一部分中初步篩選出來的差異表達(dá)血清miRNAs進(jìn)行初步驗(yàn)證;在第三部分實(shí)驗(yàn)中,我們選取了 60例早期非小細(xì)胞肺癌患者和60例年齡、性別相匹配的健康人,一共120例病例作為驗(yàn)證集進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。同樣地,提取其中的血清總RNA,然后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對通過前兩部分實(shí)驗(yàn)研究初步驗(yàn)證得到的差異表達(dá)血清miRNAs進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。最后,我們采用受試者工作曲線對經(jīng)過訓(xùn)練集和驗(yàn)證集雙重驗(yàn)證的差異表達(dá)血清miRNAs進(jìn)行診斷效能分析,確定潛在的可應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌患者早期診斷的生物標(biāo)志物。結(jié)果在第一部分實(shí)驗(yàn)中,12例病例血清提取的總RNA純度及濃度均達(dá)到后續(xù)實(shí)驗(yàn)的基本要求;每張芯片的探針點(diǎn)均成像均勻,未見有明顯異常的區(qū)域;以表達(dá)倍數(shù)變化2倍及以上,p值小于0.05的標(biāo)準(zhǔn)對芯片結(jié)果進(jìn)行篩選,可以得到122個(gè)上調(diào)差異表達(dá)的miRNAs和87個(gè)下調(diào)差異表達(dá)的miRNAs;數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果中,對于血清樣本,有31個(gè)上調(diào)差異表達(dá)的miRNAs,有28個(gè)下調(diào)差異表達(dá)的miRNAs;對于組織樣本,有172個(gè)上調(diào)差異表達(dá)的miRNA,有137個(gè)下調(diào)差異表達(dá)的miRNAs。取交集后,最終初步篩選出了 miR-185-5p、miR-431-5p、miR-484、miR-492、miR-584-5p、miR-590-3p 和 miR-631 等 7 個(gè)血清差異表達(dá)miRNAs。在第二部分實(shí)驗(yàn)中,正常對照組血清中U6的平均Ct值為23.57 ±0.23,肺癌實(shí)驗(yàn)組血清中U6的平均Ct值為23.19 ±0.25,兩組血清樣本間U6的Ct值無顯著性統(tǒng)計(jì)差異,可作為合適的內(nèi)參基因;在訓(xùn)練集中,相比于健康人,早期非小細(xì)胞肺癌患者血清中的miR-492和miR-590-3p分別上調(diào)了 1.88和1.71倍,且p值分別為0.0086和0.0141,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上意義;miR-631則下調(diào)了 1.46倍,且p值為0.0304,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上意義;而miR-185-5p、miR-431-5p和miR-484等3個(gè)miRNAs雖然也呈現(xiàn)出差異性表達(dá),但是其p值均大于0.05,差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上意義;miR-584-5p則顯示其Ct值大于40,提示其在血清中的含量極低,檢測不到。在第三部分實(shí)驗(yàn)中,在驗(yàn)證集中,相比于健康人,早期非小細(xì)胞肺癌患者血清中的miR-492和miR-590-3p分別上調(diào)了 1.65和1.69倍,且p值均小于0.0001,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上意義;miR-631則下調(diào)了 1.50倍,且p值小于0.0001,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上意義。單獨(dú)應(yīng)用miR-492、miR-590-3p或miR-631等3個(gè)血清miRNAs對健康人和早期非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行區(qū)分的AUC分別為;0.789、0.792和0.711。當(dāng)將這3個(gè)血清miRNAs作為一個(gè)組合時(shí),運(yùn)用該組合對健康人和早期非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行區(qū)分的AUC達(dá)到0.828(95%CI,0.750-0.905,p = 0.000),敏感度高達(dá) 86.7%,特異度高達(dá) 71.7%。結(jié)論由miR-492、miR-590-3p和miR-631等3個(gè)血清miRNAs組成的集合可以作為一種潛在的生物標(biāo)志物應(yīng)用于非小細(xì)胞肺癌患者的早期診斷,具有一定的臨床意義。然而,此種生物標(biāo)志物的真正臨床使用,還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究,尤其是大樣本、多中心參與的前瞻性臨床試驗(yàn)。
[Abstract]:In the first part of the experiment , we selected 6 patients with early non - small cell lung cancer and 6 healthy persons with age and sex . In the second experiment , the values of miR - 492 and miR - 590 - p in serum of non - small - cell lung cancer were significantly lower than those in healthy people , and the difference was statistically significant . Conclusion The combination of miR - 492 , miR - 590 - 3P and miR - 631 can be used as a potential biomarker in the early diagnosis of non - small cell lung cancer patients and has some clinical significance . However , the real clinical use of such biomarkers requires further experimental research , in particular large - sample and multi - center participation in prospective clinical trials .

【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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本文編號：1732035