本文選題：室間隔缺損　切入點(diǎn)：羊水多肽組學(xué)　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：室間隔缺損(VSD)是心臟最常見的先天畸形之一,約占所有先天性心臟異常的40%。VSD的發(fā)生率大約為每1000名活產(chǎn)兒中有1.35～17.3例,先天性心臟疾病也給家庭和社會(huì)造成了沉重的經(jīng)濟(jì)壓力和心理負(fù)擔(dān)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,研究者們對(duì)心臟發(fā)育的分子機(jī)制獲得了許多重要成果。特別是一些轉(zhuǎn)錄因子(TF),例如NKX2.5、GATA4、TBX5、和HOMEZ已被確定為心臟發(fā)育過(guò)程中必不可少的。根據(jù)遺傳學(xué)中心法則,蛋白質(zhì)是基因功能的最終執(zhí)行者,能顯示基因翻譯后修飾的細(xì)節(jié)。多肽組學(xué)的主要內(nèi)容是研究?jī)?nèi)源性產(chǎn)生的蛋白質(zhì)水解片段,是蛋白質(zhì)組學(xué)的一個(gè)新興的分支學(xué)科。多肽組學(xué)可以呈現(xiàn)研究樣本健康狀況的動(dòng)態(tài)變化,內(nèi)源性多肽可以直接與靶細(xì)胞相互作用,產(chǎn)生功能效應(yīng)。因此,心血管系統(tǒng)相關(guān)的蛋白質(zhì)組學(xué)、多肽組學(xué)大大拓寬了我們對(duì)心血管系統(tǒng)復(fù)雜生理和病理狀態(tài)的認(rèn)知范圍,對(duì)于迅速推進(jìn)發(fā)病機(jī)制的研究有著巨大價(jià)值。近年來(lái),隨著胎兒超聲心動(dòng)圖技術(shù)水平的不斷發(fā)展、超聲儀器設(shè)備的更新?lián)Q代,人們已經(jīng)可以在胎兒期和嬰兒期準(zhǔn)確地診斷和定位室間隔缺損。以往研究報(bào)道室間隔缺損存在一定概率的自然閉合,受到調(diào)查人群、診斷標(biāo)準(zhǔn)、檢測(cè)方法、隨訪時(shí)間及室間隔缺損類型等諸多因素影響,自然閉合率波動(dòng)于6%～71%。目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)大樣本量的孕期發(fā)現(xiàn)室間隔缺損產(chǎn)后自然閉合情況的隨訪調(diào)查。本研究第二部分旨在通過(guò)分析胎兒超聲心動(dòng)圖檢查信息、嬰兒出生時(shí)信息,結(jié)合出生后轉(zhuǎn)歸情況的隨訪,評(píng)估室間隔缺損自然閉合的發(fā)生率,希望能總結(jié)出一些室間隔自然閉合的影響因素。通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得出室間隔缺損自然閉合率的預(yù)測(cè)公式,給產(chǎn)前咨詢和預(yù)后判斷一些有實(shí)用價(jià)值的參考。第一部分室間隔缺損胎兒羊水多肽組學(xué)的分析目的：1)檢測(cè)室間隔缺損胎兒與正常對(duì)照之間羊水的內(nèi)源性多肽表達(dá)譜；2)篩選與心臟發(fā)育異常相關(guān)的生物活性多肽,為后續(xù)功能研究提供基礎(chǔ)。方法：1) 以胎兒心臟超聲診斷為室間隔缺損的人孕23-25周羊水樣本為實(shí)驗(yàn)組,孕周匹配、非疾病因素人工流產(chǎn)的正常胎兒羊水為對(duì)照組,采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)聯(lián)合串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)記法(TMT)檢測(cè)兩組之間內(nèi)源性多肽的表達(dá)情況,對(duì)原始數(shù)據(jù)去冗余后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以差異倍數(shù)1.5倍以上且變化具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)為標(biāo)準(zhǔn),篩選出差異表達(dá)的多肽；2)分析差異表達(dá)多肽的理化性質(zhì)、酶切位點(diǎn)、是否位于前體蛋白功能結(jié)構(gòu)域之內(nèi)；結(jié)合其對(duì)應(yīng)前體蛋白IPA通路分析、GO分析,最終篩選出與心臟發(fā)育相關(guān)的多肽；3)滿足上述步驟篩選出心臟發(fā)育相關(guān)的多肽作為目標(biāo)多肽,將對(duì)應(yīng)的室間隔缺損及正常對(duì)照的母親外周血血清采用高分辨率多反應(yīng)監(jiān)測(cè)體系(HR-MRM)對(duì)目標(biāo)多肽進(jìn)行追蹤,驗(yàn)證羊水?dāng)?shù)據(jù)的可靠性及其與外周血多肽的相關(guān)性；4)依據(jù)序列保守性、組織特異性等標(biāo)準(zhǔn),篩選出與心臟發(fā)育可能最密切相關(guān)的多肽；對(duì)篩選出的多肽進(jìn)行生物信息學(xué)分析,預(yù)測(cè)潛在的酶學(xué)功能改變。結(jié)果：1)對(duì)質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理后對(duì)比兩組結(jié)果,可以定量的多肽有692條,差異表達(dá)的多肽有183條,其中上調(diào)69條,下調(diào)114條；與心臟發(fā)育相關(guān)且位于其前體蛋白結(jié)構(gòu)域內(nèi)的多肽35條；2)HR-MRM母親外周血驗(yàn)證結(jié)果與胎兒羊水結(jié)果發(fā)現(xiàn)有12條多肽均有表達(dá)且趨勢(shì)一致；3) 來(lái)自NOTC4的YSGPTCH和來(lái)自C05A1的PGAPLLPPLLL這兩條多肽在心臟組織/心肌細(xì)胞中特異度較高；且具有較好的物種保守性；4)生物信息學(xué)分析顯示來(lái)自NOTC4的YSGPTCH參與了Notch信號(hào)通路的組成部分,與胚胎心臟發(fā)育密切相關(guān)；且其酶切位點(diǎn)顯示這一差異多肽的產(chǎn)生與基質(zhì)金屬蛋白酶-2和-9的活性改變相關(guān)。結(jié)論：1)與正常對(duì)照相比,室間隔缺損患兒羊水中的內(nèi)源性多肽表達(dá)譜發(fā)生了顯著變化,提示多肽可能參與調(diào)節(jié)心臟發(fā)育的過(guò)程。2)經(jīng)HR-MRM方法驗(yàn)證,羊水質(zhì)譜結(jié)果可靠,可用于后續(xù)分析。第二部分室間隔缺損自然愈合影響因素的研究目的：1) 通過(guò)對(duì)孕中期胎兒超聲心動(dòng)圖確診為單純性室間隔缺損患兒及其母親的隨訪調(diào)查,總體描繪出江蘇地區(qū)室間隔缺損胎兒出生后的轉(zhuǎn)歸情況,找出VSD自然愈合的影響因素。2) 為產(chǎn)前咨詢及臨床決策提供依據(jù),減少出生缺陷,提高人口素質(zhì)；為出生后VSD患兒的預(yù)后判斷提供參考。方法：1) 2011年1月至2013年12月在胎兒超聲心動(dòng)圖檢查室所有檢查出存在結(jié)構(gòu)性先天性心臟病的患兒,從中篩選出單純性室間隔缺損的胎兒及母親。胎兒心臟彩超采用Acuson Sequoia 512型彩色超聲診斷系統(tǒng),配有內(nèi)置數(shù)字超聲工作站。2) 超聲數(shù)據(jù)包括孕婦姓名、年齡、檢查時(shí)間孕周、聯(lián)系電話、胎心率、主肺動(dòng)脈直徑、心房心室大小、房室瓣、主肺動(dòng)脈瓣有無(wú)返流；室間隔缺損位置、缺損大小、缺損處分流情況。結(jié)合遺傳學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果(羊水穿刺、臍帶血穿刺),統(tǒng)計(jì)存在染色體數(shù)量及結(jié)構(gòu)異常的患者。3) 隨訪問(wèn)題包括目前缺損有無(wú)閉合、閉合時(shí)年齡、未閉合者治療方式、性別、出生體重、有無(wú)早產(chǎn)、孕期有無(wú)感染或代謝性疾病、有無(wú)心臟病家族史。4) 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件分析：定性資料采用交叉表分析、定量資料采用ANOVA方差分析、危險(xiǎn)因素分析采用二元logistic回歸、缺損大小與是否愈合的截?cái)嘀颠x擇采用ROC曲線。5) 2014年1月至3月出生的患兒隨訪后的實(shí)際結(jié)果與二元logistic回歸預(yù)測(cè)公式計(jì)算P值相比較,驗(yàn)證公式的實(shí)用價(jià)值。結(jié)果：1) 初始隨訪患者共423人,有效隨訪257人,44人引產(chǎn),213人出生。出生后死亡8人、存活205人。截至隨訪時(shí),19人手術(shù),24人未閉合,110人自然閉合(49人孕期閉合,61人產(chǎn)后閉合)。2) 將產(chǎn)后死亡、手術(shù)及未閉合的患兒歸入未閉合組,加上孕期閉合組和產(chǎn)后閉合組,共分為3組,比較三組間孕期B超數(shù)據(jù)及產(chǎn)后隨訪結(jié)果,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)數(shù)據(jù)有：缺損直徑(3.4224-0.972,2.426±±0.599,2.292±0.479mm)、出生體重(3.095±0.774,3.1744±0.535,3.4994-0.532kg)、缺損位置、缺損處分流方向。平均閉合時(shí)間為7.31±±6.073月。以是否愈合為狀態(tài)變量,缺損直徑為檢驗(yàn)變量,曲線下面積為0.842,Cut-off值：2.55mm。此時(shí)敏感度：0.800,特異度：0.718。二元logistic回歸顯示排除缺損位置影響后,出生體重為缺損愈合的保護(hù)因素,缺損直徑為缺損愈合的危險(xiǎn)因素。3) 我們進(jìn)而又根據(jù)二元logistic回歸預(yù)測(cè)概率公式P=(1+EXP-[-2.151-0.716*出生體重+1.393*直徑])-1。檢驗(yàn)2014年1月至3月出生的患兒,23位患兒中19位與預(yù)測(cè)結(jié)果一致。暫無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異的數(shù)據(jù)有母親年齡、胎兒主動(dòng)脈直徑、肺動(dòng)脈直徑、胎心率以及孕期母親疾病情況。結(jié)論：1) 利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,找到孕中期檢查出室間隔缺損患兒出生后缺損是否可以閉合的缺損直徑截?cái)嘀禐?.55mm,缺損越小越容易閉合；2) 出生體重大者自然愈合概率較高；3) 男性胎兒自然愈合的概率較高；肌部缺損愈合概率較高；缺損處未探及穿隔血流者易愈合；足月生產(chǎn)嬰幼兒愈合概率較高。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R714.5

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3 李正華;馮晨;紀(jì)濤;陳毓秀;徐杰;;室間隔缺損114例報(bào)告[J];現(xiàn)代醫(yī)用影像學(xué);2007年02期

4 ;解放軍總醫(yī)院成功實(shí)施世界首例全機(jī)器人微創(chuàng)下室間隔缺損手術(shù)[J];微創(chuàng)醫(yī)學(xué);2009年06期

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6 羅星照;;小型室間隔缺損的自然閉合[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料(兒科學(xué)分冊(cè));1974年02期

7 劉玉秀;;室間隔缺損[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料(兒科學(xué)分冊(cè));1976年02期

8 汪曾煒;;室間隔缺損72例的外科治療[J];遼寧醫(yī)學(xué)雜志;1978年06期

9 周苓怡;;單純室間隔缺損的自發(fā)性關(guān)閉率[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).心血管疾病分冊(cè);1988年03期

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本文編號(hào)：1580932