本文關(guān)鍵詞：遼寧海域大菱鲆病原微生物的調(diào)查及快速檢測方法的建立

  更多相關(guān)文章： 遼寧海域 大菱鲆 氣單胞菌 多重引物PCR

【摘要】：近年來大菱鲆憑借其生長快、肉質(zhì)鮮美、商品價值高等諸多優(yōu)點,成為遼寧沿海地區(qū)熱門養(yǎng)殖品種。以葫蘆島地區(qū)為代表,形成了標志性的大菱鲆養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)基地,其大菱鲆養(yǎng)殖面積達150萬平方米,產(chǎn)值15億元,養(yǎng)殖產(chǎn)量為2.5萬噸,約占全國大菱鲆養(yǎng)殖產(chǎn)量的58%。然而伴隨著養(yǎng)殖規(guī)模的迅速擴大,產(chǎn)業(yè)發(fā)展速度明顯超越了病害防治速度,根據(jù)遼寧省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站的數(shù)據(jù),近年來遼寧省工廠化養(yǎng)殖大菱鲆病害損失嚴重,平均每個月?lián)p失金額高達3萬元，占所有水產(chǎn)養(yǎng)殖品種經(jīng)濟損失總數(shù)的98%。在養(yǎng)殖過程中水溫低時,大菱鲆攝食量減少,體質(zhì)變?nèi)?就會引起細菌性疾病的爆發(fā),此類疾病一旦爆發(fā)后便難以控制,必定會為養(yǎng)殖戶帶來難以估量的損失。由于對遼寧海域大菱鲆養(yǎng)殖過程中常見致病菌的研究相對匱乏,加之相關(guān)病原微生物的快速檢測方法存在空白,導(dǎo)致遼寧省大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展受到了限制。為了解決以上問題,我們針對遼寧海域大菱鲆病原微生物進行了系統(tǒng)的調(diào)查,并根據(jù)調(diào)查結(jié)果針對相關(guān)重要病原微生物建立起快速檢測方法,主要方法為PCR檢測,具體內(nèi)容包括引物的設(shè)計,及其特異性和靈敏性的驗證。該研究對遼寧省主要的大菱鲆養(yǎng)殖基地進行了病原樣本采集,并對樣本病灶部位的菌群進行了傳統(tǒng)的分離、純化和鑒定以及16S rRNA宏基因組測序分析。研究結(jié)果表明：大菱鲆病灶部位的優(yōu)勢菌群主要有弧菌(Vibrio)和氣單胞菌(Aeromonas)等,其中溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、燦爛弧菌(Vibro Splendidus)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)和殺鮭氣單胞菌(Aeromonas salmonicida)等與大菱鲆疾病的誘發(fā)有著密切關(guān)聯(lián),嚴重威脅了該養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。鑒于該領(lǐng)域?qū)【难芯勘容^完善而對氣單胞菌的研究相對匱乏,本論文以嗜水氣單胞菌、殺鮭氣單胞菌、舒伯特氣單胞菌(Aeromonas schubertii)和溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)為主要研究對象,設(shè)計了12對特異性引物,且對各引物進行了特異性和靈敏性驗證,其結(jié)果顯示嗜水氣單胞菌引物H-2、殺鮭氣單胞菌引物Sa-1, Sa-2, Sa-3、溫和氣單胞菌引物So-1, So-2, So-3以及舒伯特氣單胞菌引物Sc-1,均有很強的特異性和靈敏性,可用于檢出單個病原菌株快速檢測方法的建立,與此同時利用引物H-2、So-3以及Sc-1建立可同時檢出3種致病菌株的多重引物PCR檢測方法,經(jīng)驗證該檢測方法特異性強、靈敏度高。本研究為大菱鲆養(yǎng)殖過程中高發(fā)致病菌的檢測和分析提供了必要的理論依據(jù)和完善的方法體系,不僅為今后大菱鲆養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展做出了貢獻,同時為其他水產(chǎn)品中病原微生物的檢測提供了指導(dǎo),為促進我國水產(chǎn)品養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的規(guī)�；】蛋l(fā)展奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：遼寧海域 大菱鲆 氣單胞菌 多重引物PCR
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S943
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-12
• 引言12-20
• 0.1 大菱鲆養(yǎng)殖概況12-13
• 0.2 大菱鲆養(yǎng)殖中常用疾病檢測技術(shù)13-17
• 0.2.1 聚合酶鏈反應(yīng)方法13-15
• 0.2.2 其他常見檢測技術(shù)15-17
• 0.3 常見致病菌的特異性基因17-19
• 0.3.1 dnaJ基因17-18
• 0.3.2 其他常見特異性基因18-19
• 0.4 研究目的及意義19-20
• 第1章 遼寧海域大菱鲆養(yǎng)殖病原微生物調(diào)查20-39
• 1.1 調(diào)查場地20-21
• 1.2 調(diào)查過程與方法21-23
• 1.2.1 實驗材料21
• 1.2.2 實驗器材21
• 1.2.3 實驗方法21-23
• 1.3 調(diào)查結(jié)果與分析23-38
• 1.3.1 大菱鲆普遍病癥調(diào)查結(jié)果23-26
• 1.3.2 常見致病菌調(diào)查結(jié)果26-38
• 1.4 小結(jié)38-39
• 第2章 主要病原細菌快速檢測方法的建立39-63
• 2.1 材料與方法39-45
• 2.1.1 實驗材料39-40
• 2.1.2 實驗方法40-45
• 2.2 結(jié)果與分析45-61
• 2.2.1 基因的選擇45-46
• 2.2.2 目的菌株特異性引物設(shè)計結(jié)果46-48
• 2.2.3 引物特異性驗證48-57
• 2.2.4 引物靈敏性驗證57-60
• 2.2.5 多重PCR條件的優(yōu)化60-61
• 2.2.6 三重PCR靈敏性驗證61
• 2.3 小結(jié)61-63
• 第3章 結(jié)論與展望63-65
• 3.1 結(jié)論63
• 3.2 展望63-65
• 致謝65-66
• 參考文獻66-69
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加科研情況69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張娜;乾義柯;尚爽;陸平;易建平;;不同引物PCR檢測向日葵黑莖病菌的靈敏度比較及應(yīng)用[J];植物保護學(xué)報;2015年05期

2 張艷艷;趙國先;馮焯;李樹鵬;;免疫學(xué)檢測技術(shù)在畜禽疾病診斷中的應(yīng)用[J];飼料廣角;2015年12期

3 張然;陳桂冰;邱亞群;林愛紅;余淑苑;;環(huán)境水中嗜肺軍團菌分離培養(yǎng)與巢式PCR檢測研究[J];實用預(yù)防醫(yī)學(xué);2015年01期

4 童桂香;韋信賢;黎小正;吳祥慶;龐燕飛;;BIOLOG自動微生物鑒定系統(tǒng)在水產(chǎn)動物病原菌檢測中的應(yīng)用[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年13期

5 董麗;王印庚;張正;曲江波;陳霞;;養(yǎng)殖大菱鲆細菌性紅體病病原菌的分離與鑒定[J];海洋科學(xué);2009年07期

6 侯宇;;熒光定量PCR技術(shù)研究進展及其應(yīng)用[J];貴州農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年06期

7 張薇;高洪文;張化永;;宏基因組技術(shù)及其在環(huán)境保護和污染修復(fù)中的應(yīng)用[J];生態(tài)環(huán)境;2008年04期

8 薛淑霞;馮守明;孫金生;;海水工廠化養(yǎng)殖大菱鲆(Scophthalmus maximus)和褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)腹水病病原菌的分離與鑒定[J];海洋與湖沼;2006年06期

9 李筠;顏顯輝;陳吉祥;王印庚;李秋芬;;養(yǎng)殖大菱鲆腹水病病原的研究[J];中國海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2006年04期

10 王斌;孫岑;范薇;劉雙鳳;劉永波;孫彥珂;;養(yǎng)殖大菱鲆出血性敗血癥病原菌致病性的研究及鑒定[J];大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報;2006年02期

，

本文編號：569298