【摘要】：研究目的:為探尋黑龍江省雪上項(xiàng)目運(yùn)動員基因選材分子標(biāo)記,本論文對我國單板坡面障礙、單板U型場地技巧、單板平行大回轉(zhuǎn)、單板追逐、北歐兩項(xiàng)和越野滑雪項(xiàng)目運(yùn)動員ace基因I/D多態(tài)性、cntf基因A/G多態(tài)性和actn3基因R/X多態(tài)性的分布情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì),根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析以上基因多態(tài)性與黑龍江省雪上項(xiàng)目運(yùn)動員的專項(xiàng)運(yùn)動能力是否存在關(guān)聯(lián),從而判斷能否將以上基因作為黑龍江省部分雪上項(xiàng)目運(yùn)動員早期選材分子標(biāo)記,為我國雪上項(xiàng)目運(yùn)動員科學(xué)選材體系提供參考,同時(shí)為同類項(xiàng)群基因選材體系的完善提供更多基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。研究方法:本研究依據(jù)雪上項(xiàng)目特點(diǎn),將所選取的68名黑龍江省部分雪上項(xiàng)目優(yōu)秀運(yùn)動員分成兩大類:雪上技巧型及雪上耐力型項(xiàng)目運(yùn)動員;同時(shí)隨機(jī)抽取158名普通大學(xué)生作為對照組。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法對受試者的ace基因I/D多態(tài)性進(jìn)行檢測,運(yùn)用限制性片段長度多態(tài)技術(shù)對受試者的cntf基因A/G多態(tài)性和actn3基因R/X多態(tài)性進(jìn)行檢測,得出不同組別此三種基因多態(tài)性頻率分布及等位基因頻率。對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行遺傳學(xué)平衡定律檢驗(yàn),判斷所選取人群是否具有群體代表性。將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,根據(jù)卡方檢驗(yàn)結(jié)果判斷以上基因與所選取項(xiàng)目杰出運(yùn)動能力是否存在關(guān)聯(lián),最終對以此三種基因作為黑龍江省部分雪上項(xiàng)目選材用分子標(biāo)記的可行性進(jìn)行分析。研究結(jié)果:1、本研究中各組ace基因I/D多態(tài)性、cntf基因A/G多態(tài)性、actn3基因R/X多態(tài)性分布均符合Hardy-Weinberg遺傳定律(P0.05),具有群體代表性,可用作群體樣本進(jìn)行研究。2、各實(shí)驗(yàn)組ace基因I/D多態(tài)性基因型及等位基因頻率分布在組間及與對照組的統(tǒng)計(jì)學(xué)對比中均無顯著性差異(P0.05)。但實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示耐力型項(xiàng)目組II基因型頻率分布(40.91%)高于技巧型項(xiàng)目組(32.61%)和對照組(29.11%)。3、cntf基因A/G多態(tài)性在技巧型雪上項(xiàng)目組與對照組間、在單板坡面障礙與越野滑雪運(yùn)動員間基因型頻率分布呈現(xiàn)顯著性差異(P0.05),等位基因頻率分布呈現(xiàn)極其顯著性差異(P0.01)。在單板坡面障礙與單板追逐運(yùn)動員間呈現(xiàn)顯著性差異(P0.05);在單板坡面障礙與對照組間呈現(xiàn)極其顯著性差異(P0.01)。技巧項(xiàng)目組GG基因型頻率及G等位基因頻率(63.05%;75.00%)顯著高于耐力項(xiàng)目組(40.91%;59.09%)及對照組(38.61%;59.49%)。4、各實(shí)驗(yàn)組actn3基因R/X多態(tài)性基因型及等位基因頻率分布在組間及與對照組的統(tǒng)計(jì)學(xué)對比中均無顯著性差異(P0.05),且分布極為相似。研究結(jié)論:1、不建議將ace基因I/D多態(tài)位點(diǎn)作為黑龍江省雪上項(xiàng)目基因選材分子標(biāo)記參考指標(biāo),但不排除該基因II基因型與I等位基因與雪上耐力型項(xiàng)目相關(guān)的可能,應(yīng)在后續(xù)研究中加大樣本量驗(yàn)證。2、cntf基因A/G多態(tài)位點(diǎn)有作為黑龍江省部分技巧型雪上項(xiàng)目,特別是單板坡面障礙項(xiàng)目運(yùn)動員基因選材分子標(biāo)記的可能,該基因GG基因型及G等位基因與杰出爆發(fā)力素質(zhì)相關(guān)。3、不建議將actn3基因R/X多態(tài)位點(diǎn)作為黑龍江省雪上項(xiàng)目基因選材分子標(biāo)記參考指標(biāo),但不排除該結(jié)果有實(shí)驗(yàn)樣本量不足的影響,應(yīng)在后續(xù)研究中加大樣本量,補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱體育學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：G863
【圖文】：

4.1.1 ace 基因 I/D 多態(tài)性判斷ace 基因位于第 17 號染色體長臂 2 區(qū) 3 帶第 3 亞帶（17q23.3），全長為共有 26 個(gè)外顯子、25 個(gè)內(nèi)含子和兩個(gè)啟動子，其中外顯子 7 和外顯子 20 有的同源性，外顯子 8 和外顯子 21 有 68%的同源性，該信息提示 ace 基因有的可能[64]。同時(shí) ace 基因具有高度多態(tài)性，目前已發(fā)現(xiàn)的多態(tài)標(biāo)記就多達(dá)在這些多態(tài)標(biāo)記中，針對第 16 內(nèi)含子存在的 287bpAlu 插入/缺失（I/D）片究的最多。由于 Alu 的插入或缺失，當(dāng)目標(biāo)片段經(jīng) PCR 擴(kuò)增后再經(jīng)瓊脂糖凝膠電測，即可出現(xiàn)兩種不同長度的片段：490bp 的插入（I）片段和 190bp 的缺失片段；在紫外燈下可呈現(xiàn)出三種帶型：單一 490bp 條帶的 II 插入型、單一條帶的 DD 缺失型和有兩個(gè)條帶 490bp+190bp 的 ID 雜合型[33]。因此，ac在此多態(tài)位點(diǎn)可分為 DD、ID 和 II 三種不同的基因型。本研究部分 ace 基因多態(tài)性檢測結(jié)果如下（圖 4）：

ace、cntf、actn3 多態(tài)位點(diǎn)作為黑龍江省雪上項(xiàng)目運(yùn)動員分子選材標(biāo)記可行性研究94bp 和 40bp，定義為 G；而不含酶切位點(diǎn)的 134bp 片段即是 A 等位基因。該酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，在紫外燈下即可呈現(xiàn)出三種帶型：單一 134bp 條帶的 AA 純合型、94bp+40bp 兩條條帶的 GG 純合型、134bp+94bp+40bp 三條條帶的 AG 雜合型。因此，cntf 基因在此多態(tài)位點(diǎn)可分為 AA、AG 和 GG 三種不同的基因型。本研究部分 cntf 基因多態(tài)性檢測結(jié)果如下（圖 5）：

核苷酸有從 C 突變?yōu)?T 位點(diǎn)的可能。如果無突變發(fā)生，則為 RR 純合子；若點(diǎn)發(fā)生突變，則為 XX 突變純合型；若既有 C 又有 T 則為 RX 雜合型。在目標(biāo) DNA 中，加入根據(jù) actn3 基因特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)?zāi)康乃O(shè)計(jì)的引物后PCR 擴(kuò)增，出現(xiàn)長度為 291bp 的 DNA 片段。如果為 RR 型，擴(kuò)增出來的片有一個(gè) Dde I 酶切位點(diǎn)；若帶有 1747C 到 T 突變，則會產(chǎn)生一個(gè)新的酶切actn3 基因 PCR 擴(kuò)增片段經(jīng) Dde I 限制性內(nèi)切酶切割后，存在一個(gè)酶切位點(diǎn)被酶切反應(yīng)切割為 205bp 和 86bp 兩種片段；存在兩個(gè)酶切位點(diǎn)的可被酶切切割為 108bp、97bp 和 86bp 三種片段。于是該酶切產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳在紫外燈下即可呈現(xiàn)出三種帶型：205bp+86bp 兩條條帶的 RR 純合108bp+97bp+86bp 三條條帶的 XX 純合型、205bp+108bp+97bp+86bp 四條條RX 雜合型。因此，actn3 基因在此多態(tài)位點(diǎn)可分為 RR、XX 和 RX 三種不基因型。本研究部分 actn3 基因多態(tài)性檢測結(jié)果如下（圖 6）：

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本文編號：2784329