LHRH-TAT-殼聚糖/siRNA復(fù)合物與巨噬細(xì)胞的相互作用以及TPP-LHRH-MPG △NLS /AFP-siRN
發(fā)布時(shí)間：2021-09-25 03:42
RNA干擾（RNA interference,RNAi）是普遍存在于真核生物體內(nèi)的一種能夠?qū)μ囟ǖ膍RNA序列進(jìn)行降解的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制。在包括肝癌在內(nèi)的多種癌癥疾病的治療研究中具有良好的應(yīng)用前景。然而,由于RNA本身具有的易降解、不易穿過(guò)細(xì)胞膜等特點(diǎn),為RNAi的臨床應(yīng)用制造了很大的阻礙。新型基因載體能夠提高RNA的遞送效率,但其生物相容性、RNA釋放以及對(duì)RNAi效率的影響需要更加深入的評(píng)估。生物相容性是評(píng)價(jià)非病毒載體與機(jī)體相互作用的一個(gè)指標(biāo),載體與免疫系統(tǒng)的相互作用不僅反映了免疫系統(tǒng)對(duì)載體的應(yīng)答情況,也是衡量載體是否對(duì)人體組織損傷程度的一個(gè)指標(biāo)。本文以不同N/P比（1：2、1：1、2：1、5：1和10：1）使LHRH-TAT-殼聚糖（LHRH-TAT-chitosan,TLC）以及未進(jìn)行任何修飾的低分子量殼聚糖（low molecular weight chitosan,LMWC）包裹siRNA后形成TLC/siRNA納米復(fù)合體。與未進(jìn)行任何修飾的殼聚糖相比,TLC具有更好的siRNA結(jié)合能力。以不同N/P（10：1、20：1）與siRNA形成納米復(fù)合體后,其粒徑分布于90-150...
【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖２納米復(fù)合物與細(xì)胞的相互作用??Ｆｉｇ．?２?Ｐｏｌｙｐｌｅｘｅｓ?ｉｎｔｅｒａｃｔ?ｗｉｔｈ?ｃｅｌｌ．??
解決上述問(wèn)題的一個(gè)方法是利用質(zhì)子海綿效應(yīng)，即當(dāng)溶酶體內(nèi)ｐＨ下降時(shí)，??陽(yáng)離子聚合物載體將大量捕獲質(zhì)子，從而引起ｃｒ的內(nèi)流，溶酶體滲透性腫脹后??破裂，內(nèi)涵體中的物質(zhì)最終釋放到細(xì)胞質(zhì)中（圖３）。另外，將經(jīng)由內(nèi)吞所造成的??ｐＨ變化作為一個(gè)＂開(kāi)關(guān)＂，使其中包裹的核酸或藥品在ｐＨ變小時(shí)得到充分釋??放，也可Ｗ作為有效物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部釋放的一個(gè)標(biāo)志。根據(jù)這些概念，吳傳保等??于２００８年將己二胺、二己胺、Ｈ己胺＆及乙醇胺為陽(yáng)離子聚合物材料，用酸堿??滴定法探討質(zhì)子海綿效應(yīng)的根源。研究表明，質(zhì)子海綿效應(yīng)與上述材料中氨基Ｂ??位甚至更遠(yuǎn)的位置是否有強(qiáng)電子吸附基團(tuán)有關(guān)［４５ｌ．??ＴＡＴ蛋白是由ＨＩＶ病毒基因編碼的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ?ｏｆ??ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，?ＴＡＴ），通過(guò)與反式激活應(yīng)答ＲＮＡ序列的結(jié)合，起始基因的轉(zhuǎn)錄。??在該多膚的中部序列中，包含一個(gè)由２個(gè)賴氨酸和６個(gè)精氨酸殘基組合而成的高??豐度陽(yáng)離子區(qū)域，在Ｎ－端有一個(gè)ａ－螺旋結(jié)構(gòu)ｔＷ。ＴＡＴ通過(guò)細(xì)胞膜的相關(guān)機(jī)制尚??不清楚。早期的研巧中
Ｆｉｇ．?１０?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?也ｅ?ｂｒｉｇｈ化。ｓ?ｏｆ?ｂａｎｄｓ??利用Ｉｍａｇｅ?Ｊ軟件分析ＡＦＰ條帶與內(nèi)參ｐ－ａｃｔｉｎ條帶亮度，兩者的比值可Ｗ??反映該基因的抑制情況。由表５與圖１０可知，ＨｅｐＧ２細(xì)胞的ＡＦＰ基因表達(dá)沒(méi)有??受到明顯的抑制，而Ｂｅｌ７４０２?＾＾＾及Ｌ０２兩種細(xì)胞的ＡＦＰ－ｍＲＮＡ則受到了明顯的??抑制。對(duì)Ｌ０２的作用能夠表明ＴＰＰ的連接影響了載體的祀向性。陽(yáng)性對(duì)照的結(jié)??果顯示，ＡＦＰ－ｓｉＲＮＡ對(duì)ＨｑｊＧ２的影響比Ｂｅｌ７４０２大。此ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果需要進(jìn)一??步驗(yàn)證。??４．討論??人們通常利用化學(xué)修飾的方式為常規(guī)的載體賦予一定的特性，使其獲得更好??的組織相容性。ＴＰＰ主要用于殼聚糖載體的修飾，近期的研究也將ＴＰＰ應(yīng)用于??ＰＥＧｂＰＰＡ載體中ＰＰＡ氨基端的修飾。在ＴＰＰ的作用下，兩種載體均獲得了更??加穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)和粒徑，Ｗ及更高的腫瘤細(xì)胞殺傷力。因此，本文試圖利用ＴＰＰ??來(lái)修飾多膚載體ＬＨＲＨ－ＭＰＧ＆ＷＵ，并觀察ＴＰＰ對(duì)載體各種指標(biāo)的影響。??３９??
本文編號(hào)：3409020
【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖２納米復(fù)合物與細(xì)胞的相互作用??Ｆｉｇ．?２?Ｐｏｌｙｐｌｅｘｅｓ?ｉｎｔｅｒａｃｔ?ｗｉｔｈ?ｃｅｌｌ．??
解決上述問(wèn)題的一個(gè)方法是利用質(zhì)子海綿效應(yīng)，即當(dāng)溶酶體內(nèi)ｐＨ下降時(shí)，??陽(yáng)離子聚合物載體將大量捕獲質(zhì)子，從而引起ｃｒ的內(nèi)流，溶酶體滲透性腫脹后??破裂，內(nèi)涵體中的物質(zhì)最終釋放到細(xì)胞質(zhì)中（圖３）。另外，將經(jīng)由內(nèi)吞所造成的??ｐＨ變化作為一個(gè)＂開(kāi)關(guān)＂，使其中包裹的核酸或藥品在ｐＨ變小時(shí)得到充分釋??放，也可Ｗ作為有效物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部釋放的一個(gè)標(biāo)志。根據(jù)這些概念，吳傳保等??于２００８年將己二胺、二己胺、Ｈ己胺＆及乙醇胺為陽(yáng)離子聚合物材料，用酸堿??滴定法探討質(zhì)子海綿效應(yīng)的根源。研究表明，質(zhì)子海綿效應(yīng)與上述材料中氨基Ｂ??位甚至更遠(yuǎn)的位置是否有強(qiáng)電子吸附基團(tuán)有關(guān)［４５ｌ．??ＴＡＴ蛋白是由ＨＩＶ病毒基因編碼的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ?ｏｆ??ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，?ＴＡＴ），通過(guò)與反式激活應(yīng)答ＲＮＡ序列的結(jié)合，起始基因的轉(zhuǎn)錄。??在該多膚的中部序列中，包含一個(gè)由２個(gè)賴氨酸和６個(gè)精氨酸殘基組合而成的高??豐度陽(yáng)離子區(qū)域，在Ｎ－端有一個(gè)ａ－螺旋結(jié)構(gòu)ｔＷ。ＴＡＴ通過(guò)細(xì)胞膜的相關(guān)機(jī)制尚??不清楚。早期的研巧中
Ｆｉｇ．?１０?Ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?也ｅ?ｂｒｉｇｈ化。ｓ?ｏｆ?ｂａｎｄｓ??利用Ｉｍａｇｅ?Ｊ軟件分析ＡＦＰ條帶與內(nèi)參ｐ－ａｃｔｉｎ條帶亮度，兩者的比值可Ｗ??反映該基因的抑制情況。由表５與圖１０可知，ＨｅｐＧ２細(xì)胞的ＡＦＰ基因表達(dá)沒(méi)有??受到明顯的抑制，而Ｂｅｌ７４０２?＾＾＾及Ｌ０２兩種細(xì)胞的ＡＦＰ－ｍＲＮＡ則受到了明顯的??抑制。對(duì)Ｌ０２的作用能夠表明ＴＰＰ的連接影響了載體的祀向性。陽(yáng)性對(duì)照的結(jié)??果顯示，ＡＦＰ－ｓｉＲＮＡ對(duì)ＨｑｊＧ２的影響比Ｂｅｌ７４０２大。此ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果需要進(jìn)一??步驗(yàn)證。??４．討論??人們通常利用化學(xué)修飾的方式為常規(guī)的載體賦予一定的特性，使其獲得更好??的組織相容性。ＴＰＰ主要用于殼聚糖載體的修飾，近期的研究也將ＴＰＰ應(yīng)用于??ＰＥＧｂＰＰＡ載體中ＰＰＡ氨基端的修飾。在ＴＰＰ的作用下，兩種載體均獲得了更??加穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)和粒徑，Ｗ及更高的腫瘤細(xì)胞殺傷力。因此，本文試圖利用ＴＰＰ??來(lái)修飾多膚載體ＬＨＲＨ－ＭＰＧ＆ＷＵ，并觀察ＴＰＰ對(duì)載體各種指標(biāo)的影響。??３９??
本文編號(hào)：3409020
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