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殼聚糖—海藻酸鈉包封紅細胞用于異種輸血的研究

發(fā)布時間:2018-04-10 02:41

  本文選題:紅細胞 切入點:異種輸血 出處:《重慶大學(xué)》2015年博士論文


【摘要】:血液作為一種特殊的資源,在臨床急救中有非常重要的應(yīng)用。然而,由于血液本身的特性及條件限制,無法進行長期保存,世界各國均存在不同程度的血源短缺。人們一直在努力尋找一種來源充足,安全有效的血液替代品作為目前庫血體系的補充。血液代用品研究主要有血紅蛋白類氧載體和異種紅細胞改性兩條發(fā)展思路。異種輸血的主要障礙是動物與人的種間免疫排斥問題。近年來,異種器官移植領(lǐng)域的一系列研究進展,使異種輸血研究也逐漸成為輸血醫(yī)學(xué)新的研究熱點。本課題運用微囊化免疫隔離技術(shù)包封紅細胞,正是異種紅細胞改性后作為潛在血液替代品研究的一種新嘗試。目的基于聚電解質(zhì)絡(luò)合原理,研究殼聚糖-海藻酸鈉包封紅細胞的工藝流程和適宜條件,制備單細胞包封的殼聚糖-海藻酸鈉改性紅細胞。分析殼聚糖-海藻酸鈉包封對紅細胞性質(zhì)與結(jié)構(gòu)功能的影響,研究殼聚糖-海藻酸鈉包封紅細胞的免疫原性與體內(nèi)循環(huán)時間,探討殼聚糖-海藻酸鈉包封的免疫隔離效果。研究包封紅細胞輸入動物體內(nèi)的效果和影響,探索殼聚糖-海藻酸鈉包封紅細胞用于異種輸血的潛在可能性。方法采用不同濃度的殼聚糖和海藻酸鈉孵育紅細胞,通過血細胞分析儀進行紅細胞計數(shù),計算單包封紅細胞得率,優(yōu)化包封條件。運用顯微(細胞)電泳實驗測定包封過程中紅細胞表面電荷變化,并采用熒光標記海藻酸鈉包封紅細胞的方法鑒定殼聚糖-海藻酸鈉包封紅細胞的結(jié)構(gòu)。采用光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察包封紅細胞形態(tài)學(xué)和完整性。測定包封前后紅細胞的尺寸和滲透脆性變化,采用紅細胞變形儀和血氧分析儀檢測包封紅細胞的變形性,聚集性以及氧親和力,分析包封紅細胞的力學(xué)特性和攜氧功能。運用交叉配血試驗觀測包封紅細胞與人標準血清,人血漿及大鼠血漿的聚集反應(yīng);采用小鼠尾靜脈注射紅細胞實驗測定包封紅細胞的動物體內(nèi)循環(huán)時間,分析聚糖-海藻酸鈉包封的免疫隔離效果。通過大鼠換血模型,失血性休克-微循環(huán)觀測模型以及大鼠重度失血性休克-復(fù)蘇模型研究殼聚糖-海藻酸鈉包封紅細胞輸入動物體內(nèi)的攜氧功能、改善微循環(huán)和血流動力學(xué)的特性以及綜合抗休克療效,探討包封紅細胞用于異種輸血的可行性。結(jié)果利用聚電解質(zhì)層層自組裝技術(shù),殼聚糖和海藻酸鈉在紅細胞外形成微囊膜,可以制備單包封的紅細胞,單包封紅細胞的得率接近90%。包封過程中紅細胞表面電荷由帶負電轉(zhuǎn)變?yōu)閹д?再轉(zhuǎn)為帶負電,制備完成的包封紅細胞帶負電荷的量與天然紅細胞相當。殼聚糖-海藻酸鈉包封后紅細胞直徑略有增加,而形態(tài)學(xué)和滲透脆性基本沒有改變。包封紅細胞變形能力有所降低,與保存3周的人紅細胞相當,其聚集性沒有顯著變化。殼聚糖-海藻酸鈉微囊包封后紅細胞的氧親和力增大(P50值從接29.8下降到25.4mmHg),但更接近天然人紅細胞的氧親和力。殼聚糖-海藻酸鈉微囊包封使豬紅細胞與人標準血清反應(yīng)聚集程度由強陽性下降為接近陰性,而與人冰凍混合血漿及大鼠混合血漿交叉配血的反應(yīng)強度降為接近陰性和陰性。紅細胞動物體內(nèi)循環(huán)時間數(shù)據(jù)顯示,殼聚糖-海藻酸鈉包封豬紅細胞的24小時存活率接近50%,在小鼠體內(nèi)的半壽期為20.7小時,約為未包封紅細胞的9倍。動物實驗結(jié)果表明,異種紅細胞經(jīng)過殼聚糖-海藻酸鈉包封后輸入大鼠體內(nèi)后不會被機體快速清除,與右旋糖酐溶液相比可以維持更高的平均動脈壓和血液紅細胞壓積,提高換血大鼠的存活時間。加入包封紅細胞后,并沒降低右旋糖酐40良好的改善微循環(huán)的效果,能有效的改善并恢復(fù)由失血性休克引起的微循環(huán)障礙。在失血性休克-復(fù)蘇過程中輸入一定量的包封紅細胞有利于恢復(fù)和維持大鼠更高的平均動脈壓,部分恢復(fù)剩余堿、動脈血氧分壓以及pH等血氣指標,改善缺氧引起的機體代謝性酸中毒。與同種異體紅細胞類似,包封紅細胞一定時間內(nèi)能夠在體內(nèi)發(fā)揮正常紅細胞的功能,具有顯著的抗休克效果。結(jié)論本課題基于聚電解質(zhì)層層自組裝技術(shù),實現(xiàn)了紅細胞的殼聚糖-海藻酸鈉單細胞包封。殼聚糖-海藻酸鈉包封對紅細胞的結(jié)構(gòu)和功能略有影響,但包封紅細胞仍具有與天然紅細胞類似的力學(xué)特性和攜氧功能。殼聚糖-海藻酸鈉微囊的免疫隔離效果能夠顯著降低異種紅細胞的免疫原性,延長其體內(nèi)循環(huán)時間。包封紅細胞輸入動物體內(nèi)后能夠在一定時間內(nèi)發(fā)揮正常紅細胞的功能,具有用于異種輸血的潛在可能性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:重慶大學(xué)
【學(xué)位級別】:博士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:R457.1

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本文編號:1729333

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