本文選題：大腸埃希菌　切入點：多重耐藥　出處：《四川醫(yī)科大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:了解瀘州地區(qū)大腸埃希菌(Escherichia coli,E.coli)攜帶ampC基因及耐喹諾酮類突變靶位基因的情況,并對二者的相關性進行探討;同時分析攜帶突變基因的菌株對喹諾酮類抗菌藥物的耐藥情況,為臨床治療耐多藥菌株的合理選擇抗菌藥物提供理論依據(jù)。方法:1.PCR技術:使用細菌基因組DNA提取試劑盒按使用說明提取細菌基因組DNA用作PCR反應模板。5對引物進行擴增,擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳,并于254nm波長的紫外燈下用圖像處理器照相。2.基因測序:將PCR產(chǎn)物進行膠回收,回收產(chǎn)物用核酸定量儀測DNA濃度合格(大于300ng/μl)后,送至上海生工技術公司進行基因測序。3.藥物敏感試驗:3.1鑒定高產(chǎn)AmpC酶菌株:經(jīng)過檢測菌株對頭孢西丁的抑菌環(huán)≤18mm為可疑產(chǎn)AmpC酶菌株,再通過頭孢西丁三維試驗方法,通過檢測大腸埃希菌的β-內(nèi)酰胺酶能否水解頭孢西丁(蝕環(huán)現(xiàn)象)來確證產(chǎn)酶菌株。3.2紙片擴散法(Kerby-Bauer,K-B):測定臨床分離株大腸埃希菌對氧氟沙星(OFX)、洛美沙星(LOM)、環(huán)丙沙星(CIP)、萘啶酸(NA)、諾氟沙星(NOR)、頭孢西丁(FOX)、頭孢噻肟(CTX)、頭孢吡肟(FEP)、氨曲南(ATM)、亞胺培南(IPM)、鏈霉素(S)、慶大霉素(GEN)等抗菌藥物的敏感性。結果:1.ampC基因攜帶:71株大腸埃希菌檢出ampC基因陽性61株(85.92%)。2.喹諾酮靶位基因突變:選出5種基因電泳均見清晰條帶的55株菌株的基因產(chǎn)物進行測序比對,GyrA亞基49株出現(xiàn)S83L位氨基酸替換、36株出現(xiàn)D87N位氨基酸替換;GyrB亞基3株出現(xiàn)基因突變但未出現(xiàn)氨基酸替換;Par C亞基34株出現(xiàn)S80I替換及8株A56P替換;ParE亞基6株出現(xiàn)E84G替換、4株A426V替換及3株S458A替換。同時存在ampC基因陽性且喹諾酮類靶位基因突變菌株有51株(92.72%)。3.產(chǎn)AmpC酶情況:61株ampC基因陽性株中有10株(16.39%)對頭孢西丁藥敏紙片抑菌環(huán)≤18mm。確證產(chǎn)AmpC酶菌株8株(13.11%)。4.藥敏結果:(1)實驗菌株對亞胺培南敏感性最高,達100%,其次是頭孢西丁、頭孢吡肟、氨曲南等抗菌藥物,而較低的是部分喹諾酮類抗菌藥物及頭孢噻肟、慶大霉素、鏈霉素等。(2)ampC基因陽性菌株對NA、NOR、OFX三種抗菌藥物的耐藥率高于ampC基因陰性菌株(P0.05)。高產(chǎn)AmpC酶對CIP的耐藥率高于非產(chǎn)AmpC酶菌株(P0.05)。(3)55株測序菌株中,耐多藥大腸埃希菌有21株(38.18%),其中同時存在ampC基因陽性且喹諾酮類靶位基因出現(xiàn)突變的菌株占71.43%,產(chǎn)AmpC酶菌株占38.10%。另外,菌株對喹諾酮類藥物的交叉耐藥現(xiàn)象也比較常見,耐三種及以上喹諾酮類抗菌藥物的菌株有22株(40%)。(4)耐多藥菌株中突變耐藥位點與雙耐藥相比較差距不大,但不同的是出現(xiàn)了ampC陽性聯(lián)合gyrA+parC+parE基因的突變,而全敏和單耐菌株僅表現(xiàn)為單個耐藥位點的突變。結論:1.本地區(qū)臨床分離的大腸埃希菌中攜帶ampC基因的菌株常見(85.92%),且在耐多藥菌株中占90.48%,高產(chǎn)AmpC酶菌株相對較少(11.27%),但主要分布在耐多藥大腸埃希菌中。2.喹諾酮類靶位基因突變情況在臨床分離株中常見,多位點突變以gyrA聯(lián)合parC基因的突變?yōu)橹?耐多藥菌株中,多位點突變以ampC陽性聯(lián)合gyrA及parC基因的突變?yōu)橹鳌?.ampC基因檢出陽性菌株對萘啶酸、諾氟沙星、氧氟沙星耐藥性高于ampC基因檢出陰性菌株,高產(chǎn)AmpC酶菌株對環(huán)丙沙星的耐藥率高于非產(chǎn)AmpC酶菌株。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R446.5

【二級參考文獻】

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本文編號：1635653