本文關(guān)鍵詞：乙醇對氯胺酮誘導(dǎo)大鼠的條件性位置偏愛的影響及對大鼠腦區(qū)多巴胺含量的影響

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【摘要】：目的 1.建立氯胺酮依賴模型,觀察氯胺酮注射劑量及注射持續(xù)時間對大鼠條件性位置偏愛(conditioned place preference, CPP)的影響,以及乙醇對不同劑量氯胺酮誘導(dǎo)大鼠CPP的影響。 2.采用ELISA定量分析方法,檢測各實(shí)驗(yàn)組和對照組大鼠相關(guān)腦區(qū)多巴胺(Dopamine, DA)的含量。對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,闡明氯胺酮注射劑量及注射持續(xù)時間對大鼠相關(guān)腦區(qū)DA的影響水平,以及乙醇對氯胺酮誘導(dǎo)大鼠相關(guān)腦區(qū)DA的影響水平。探討乙醇對氯胺酮誘導(dǎo)大鼠相關(guān)腦區(qū)DA的影響產(chǎn)生作用的機(jī)制。 方法 1.實(shí)驗(yàn)動物分組、CPP實(shí)驗(yàn)和腦區(qū)DA檢測 將72只大鼠隨機(jī)分為生理鹽水對照組(N組12只)、乙醇灌胃對照組(E組12只)、氯胺酮注射組(K組24只)、氯胺酮注射乙醇灌胃組(KE組24只)4個大組。生理鹽水對照組分為注射30天組(N1組)和注射60天組(N2組)。乙醇灌胃對照組分為乙醇灌胃30天組(E30組)、乙醇灌胃60天組(E60組)。氯胺酮注射組分為30mg/kg氯胺酮注射30天組(K130組)、30mg/kg氯胺酮注射60天組(K160組)、60mg/kg氯胺酮注射30天組(K230組)、60mg/kg氯胺酮注射60天組(K260組)。氯胺酮注射乙醇灌胃組分為30mg/kg氯胺酮注射與乙醇灌胃30天組(K1E30組)、30mg/kg氯胺酮注射與乙醇灌胃60天組(K1E60組)、60mg/kg氯胺酮注射與乙醇灌胃30天組(K2E30組)、60mg/kg氯胺酮注射與乙醇灌胃60天組(K2E60組)。N1組、N2組大鼠按15mg/kg體重的劑量經(jīng)腹腔注射生理鹽水,每天給藥1次,每次間隔24h,連續(xù)給藥30天、60天。E1組、E2組大鼠按2mL/kg劑量以20%的乙醇水溶液灌胃,每天給藥1次,每次間隔24h,連續(xù)給藥30天、60天。K130組、K160組大鼠按30mg/kg劑量腹腔注射10mg/mL氯胺酮,每天注射1次,每次間隔24h,連續(xù)給藥30天、60天。K230組、K260組大鼠按60mg/kg劑量腹腔注射10mg/mL氯胺酮,每天注射1次,每次間隔24h,連續(xù)給藥30天、60天。K1E30組、K1E60組大鼠按2mL/kg劑量以20%的乙醇水溶液灌胃5min后按30mg/kg劑量腹腔注射1Omg/mL氯胺酮,每天注射1次,每次間隔24h,連續(xù)給藥30天、60天。K2E30組、K2E60組大鼠按2mL/kg劑量以20%的乙醇水溶液灌胃5min后按60mg/kg劑量腹腔注射10mg/mL氯胺酮,每天注射1次,每次間隔24h,連續(xù)給藥30天、60天。 生理鹽水對照組、氯胺酮注射組、氯胺酮注射乙醇灌胃組大鼠于末次給藥24h置于鼠博士動物行為學(xué)分析系統(tǒng)中,按操作方法進(jìn)行CPP實(shí)驗(yàn)后15min處死；乙醇灌胃對照組末次給藥24h后處死。所有大鼠對照其腦區(qū)分布圖譜,按分組進(jìn)行解剖,分離出所需腦區(qū)組織,經(jīng)處理后按所建立的ELISA分析方法用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計(jì)算其中DA含量,并采用SPSS軟件對定量分析結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果 1.實(shí)驗(yàn)大鼠的CPP效應(yīng) 與生理鹽水對照組相比,氯胺酮注射組及氯胺酮注射乙醇灌胃組的條件性位置偏愛效應(yīng)均有顯著性差異(P0.05)。與K130組相比,K1E30組伴藥箱停留時間明顯延長,存在顯著性差異(P0.05)；隨著注射持續(xù)時間的延長,K160、K1E60的CPP效應(yīng)出現(xiàn)消退,K1E60組與K160組相比,伴藥箱停留時間增多,但差異性不明顯(P0.05)。與K230組相比,K2E30組伴藥箱停留時間明顯減少,有顯著性差異(P0.05)；但隨著注射持續(xù)時間的延長,K260組、K2E60組的CPP效應(yīng)出現(xiàn)消退,K2E60組與K260組相比,伴藥箱停留時間減少,但差異性不明顯(P0.05)。 2. ELISA定量分析方法 按ELISA實(shí)驗(yàn)方法,以DA系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度與OD值進(jìn)行曲線性回歸,結(jié)果表明相關(guān)系數(shù)γ=0.9995,檢測范圍0.156ng/ml-10ng/ml,靈敏度為0.039ng/ml,適用于大鼠腦區(qū)中DA含量的檢測。 3. ELISA測定各組相關(guān)腦區(qū)DA含量 (1)在前額葉皮質(zhì)中,同N1相比,E30組大鼠前額葉皮質(zhì)中DA含量升高,無顯著差異性(P0.05),隨著持續(xù)給藥時間的延長,相較于E30組,E60組DA含量升高,有顯著性差異(P0.05)；K130組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長,K160組DA含量相較于K130組明顯增高,同N1相比,具有顯著性差異(P0.01)；K1E30組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.01),隨著給藥時間的延長K1E60組DA含量較K1E30組降低,與N1組相比,有顯著性差異(P0.05)。同N1相比,K230組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.01),隨著給藥時間的延長,K260組DA含量相較于K230組降低,與N1組相比,具有顯著性差異(P0.01)；K2E30組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長K2E60組DA含量較K2E30組升高,與N1組相比,有顯著性差異(P0.05)。同E30組相比,K1E30組及K2E30組前額葉皮質(zhì)中DA含量均升高,有顯著性差異(P0.05)。隨著時間的延長,K1E60組DA含量水平降低,且低于E60天組,無顯著性差異(P0.05)。 (2)在伏隔核中,同N1相比,E30組大鼠前額葉皮質(zhì)中DA含量明顯升高,有顯著差異性(P0.05),隨著持續(xù)給藥時間的延長,相較于E30組,E60組DA含量升高,有顯著性差異(P0.05)；K130組同N1相比,其DA含量明顯升高,有顯著差異性(P0.05),隨著持續(xù)給藥時間的延長,相較于K130組,K160組DA含量升高,有顯著性差異(P0.05)。K1E30組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長K1E60組DA含量較K1E30組降低,有顯著性差異(P0.05)。同N1相比,K230組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長,K260組DA含量相較于K230組明顯降低,具有顯著性差異(P0.05)；K2E30組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長K2E60組DA含量較K2E30組降低,有顯著性差異(P0.05)。持續(xù)給藥30天后,各實(shí)驗(yàn)組DA含量水平依次為：K230組K1E30組K2E30組K130組E30組N1,K2組DA含量最高(1.018±0.253ng/m;);K1E30組DA含量較K130組明顯升高,且明顯高于E30組,均具有顯著性差異(P0.05)；K2E組DA含量與K2組比較卻明顯降低,但仍高于E組,均具有顯著性差異(P0.05)。持續(xù)給藥60天后,各實(shí)驗(yàn)組DA含量水平依次為：K260組K2E60組KXE60組K160組E60組N2,K260組DA含量最高(0.803±0.551ng/ml);K1E60組中DA含量較K160組、E60組稍高,但差異性不明顯(P0.05)；K2E60組與K260組比較,DA含量降低,較E組稍有升高(P0.05)。 (3)在腹側(cè)被蓋中,同N1相比,E30組大鼠前額葉皮質(zhì)中DA含量升高,隨著持續(xù)給藥時間的延長,相較于E30組,E60組DA含量升高,有顯著性差異(P0.05)；K130組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長,K160組DA含量相較于K130組明顯增高,具有顯著性差異(P0.05)；K1E30組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長K1E60組DA含量較K1E30組升高,有顯著性差異(P0.05)。同N1相比,K230組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長,K260組DA含量相較于K230組明顯降低,具有顯著性差異(P0.05)；K2E30組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長K2E60組DA含量較K2E30組升高,有顯著性差異(P0.05)。 給藥30天后,DA含量水平依次為K230組K1E30組K2E30組K130組E30組N1,K2組DA含量最高(1.680±0.262ng/ml)；K1E30組DA含量較K130組明顯升高,且高于E30組,均具有顯著性差異(P0.05)；K2E30組DA含量與K230組比較卻明顯降低,但仍高于E組(P0.05)。給藥60天后,DA含量水平依次為：K260組K1E60組K2E60組K160組E60組N2,K260組DA含量最高(1.454±0.041ng/ml)。 (4)在海馬中,同N1相比,E30組大鼠前額葉皮質(zhì)中DA含量明顯升高,有顯著差異性(P0.05),隨著持續(xù)給藥時間的延長,相較于E30組,E60組DA含量升高,差異性不明顯(P0.05),但仍高于N2,存在顯著性差異(P0.05)；K130組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長,K160組DA含量相較于K130組明顯減少,具有顯著性差異(P0.05)；K1E30組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長K1E60組DA含量較K1E30組降低,有顯著性差異(P0.05)。同N1相比,K230組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長,K260組DA含量相較于K230組明顯降低,具有顯著性差異(P0.05)；K2E30組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長K2E60組DA含量較K2E30組降低,有顯著性差異(P0.05)。 在持續(xù)給藥30天組,各組DA含量水平依次為：K230組K1E30組K2E30組K130組E30組N1組,K230組DA含量最高(1.265±0.106ng/ml);K1E30組DA含量較K130組明顯升高,具有顯著性差異(P0.05);K2E30組DA含量與K230組比較卻明顯降低(P0.05)。在周期60天時,DA含量水平依次為：K260組K1E60組K2E60組K160組E60組N2,K260組DA含量最高(0.567±0.029ng/ml);K1E60組中DA含量較K160組稍高,沒有明顯差異(P0.05)；K2E60組與K260組比較,DA含量降低,沒有明顯差異(P0.05)。 (5)在紋狀體中,同N1相比,E30組大鼠前額葉皮質(zhì)中DA含量明顯升高,有顯著差異性(P0.05),隨著持續(xù)給藥時間的延長,相較于E30組,E60組DA含量升高,存在顯著性差異(P0.05)；K130組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長,K160組DA含量相較于K130組明顯增多,具有顯著性差異(P0.05)；K1E30組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長K1E60組DA含量較K1E30組降低,有顯著性差異(P0.05)。同N1相比,K230組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長,K260組DA含量相較于K230組明顯降低,具有顯著性差異(P0.05)；K2E30組DA含量與N1組相比呈升高趨勢,有顯著性差異(P0.05),隨著給藥時間的延長K2E60組DA含量較K2E30組降低,有顯著性差異(P0.05)。 與E30組相比,K1E30組與K2E30組的DA含量均明顯高于E30組,且具有顯著性差異(P0.01、P0.05)。在持續(xù)給藥30天各組中,DA含量水平依次為：K1E30組K230組K2E30組K130組E30組N1,K1E30組DA含量最高(2.013±0.416ng/ml);K1E30組DA含量較K130組呈現(xiàn)明顯升高,具有顯著性差異(P0.05)；K2E30組DA含量與K230組比較稍降低,具有顯著性差異(P0.05)。在持續(xù)給藥60天的各組中,DA含量水平依次為：K260組K1E60組K160組K2E60組E60組N2,K260組DA含量最高(0.793±0.023ng/ml);K1E60組中DA含量較K160組稍高,但沒有明顯差異(P0.05)；K2E60組與K260組比較,DA含量降低,但沒有明顯差異(P0.05)。 結(jié)論： 1.采用多次腹腔注射氯胺酮,結(jié)合條件性位置偏愛實(shí)驗(yàn)的方法成功建立氯胺酮依賴大鼠模型。通過對比,在動物模型上證明氯胺酮存在著很強(qiáng)的精神依賴性潛力。并且氯胺酮與乙醇合用后也表現(xiàn)出明顯的條件性位置偏愛。 2.乙醇能夠增強(qiáng)30mg/lkg氯胺酮引起的DA含量增多效應(yīng),推測乙醇可能協(xié)同氯胺酮對NMDA受體產(chǎn)生抑制作用,從而增加DA釋放使腦部DA含量增加。這種協(xié)同作用隨著給藥時間的延長會有所消退。 3.乙醇能夠抑制60mg/kg氯胺酮引起的DA含量增高效應(yīng),這種抑制作用隨著時間的延長逐漸增強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：乙醇 大鼠 氯胺酮 位置偏愛 多巴胺
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：D919
【目錄】：

• 中文摘要5-10
• 英文摘要10-17
• 引言17-20
• 材料和方法20-25
• 結(jié)果25-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 綜述46-52
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 讀研期間發(fā)表文章52-53
• 致謝53

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：605952