本文關(guān)鍵詞：不同溺死類型大鼠肺組織中應激相關(guān)基因的表達水平研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:水中尸體死因的鑒定一直是法醫(yī)學領(lǐng)域的難點。生前入水與死后入水是水中尸體死因的兩個類別。其中生前入水即溺死又可分為典型溺死與非典型溺死(干性溺死)兩種。目前,溺死的法醫(yī)學鑒定主要是在排除其他死因的基礎上綜合尸體征象與實驗室檢測作出判斷,并無一個明確特異的金標準。典型溺死尸體征象明顯,鑒定方法多樣,但實際案例中檢出率并不高。非典型溺死由于死亡機制特殊,時間過程短,所以尸體征象往往不明顯,易與死后拋尸入水混淆。刑事案件中,區(qū)分生前入水與死后入水是明確案件性質(zhì)的關(guān)鍵。在尸體征象不明顯時,如有一種方法可以將典型溺死與干性溺死明確區(qū)分,排除易于混淆的一種,那么將有助于進一步區(qū)分生前入水與死后入水。由于非典型溺死與典型溺死死亡機制與過程并不相同,入水后發(fā)生的應激反應也不相同,進而參與調(diào)節(jié)應激反應的應激相關(guān)基因必然有所差異。本課題組建立了非典型性溺死與典型溺死兩種大鼠模型,依照人類應激基因庫選取了88種大鼠應激相關(guān)基因,在前期對管家基因穩(wěn)定性研究的基礎上選取了6種管家基因作為內(nèi)參照基因,使用實時熒光定量PCR技術(shù)相對定量檢測兩種模型大鼠肺組織內(nèi)88種應激相關(guān)基因的差異表達,希望能夠發(fā)現(xiàn)一種或多種可以特異性區(qū)分兩種死因的應激相關(guān)基因,作為鑒別非典型溺死與典型溺死的生物標志物。方法:1.研究對象:成年雄性SD大鼠8只,質(zhì)量150g~220g,由山西醫(yī)科大學動物實驗中心提供。將8只大鼠隨機分為兩組,即非典型溺死組(實驗組)與典型溺死組(對照組)。對照組大鼠投入水桶中至溺死撈出,實驗組大鼠投入水桶中至大鼠鼻部第一次進入水中后將其撈出,迅速給予頸椎脫臼法處死(桶中水面高度約高于大鼠身長加尾長總和10 cm,并且水面高度約低于容器邊緣至少10 cm;水為室溫下放置2—3 d的自來水,水溫10℃)。解剖大鼠,取其靠近右心室部位肺組織5g,放入裝有1ml RNAlater的取樣管中備用,-70℃低溫冰箱保存。2.試驗方法:組織提取RNA;RNA反轉(zhuǎn)錄為c DNA第一鏈;分別設計引物,通過實時熒光定量PCR檢測8例大鼠肺組織中88種應激相關(guān)基因和6種常用的管家基因的Ct值。3.統(tǒng)計學處理:實驗所得數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差表示,使用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學分析,多樣本均數(shù)比較采用方差分析,各組數(shù)據(jù)兩兩比較采用t檢驗。結(jié)果:1.本實驗動物模型建立過程中,8只大鼠均在入水10~13min后鼻部第一次嗆水,典型溺死組大鼠從鼻部第一次嗆水至大鼠在水中溺亡,平均耗時大于5min。隨后大鼠尸體解剖觀測到,非典型溺死組大鼠肺組織無肉眼可見的水性肺氣腫,切面無溺液流出,胃腔內(nèi)無溺液存在,該模型為有效模型。2.6種管家基因中GAPDH基因在多個樣本中未檢測到,故在進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計時排除。其余5種管家基因(B2M、HMBS、HORT1、OAZ1、ACTB)穩(wěn)定性好,經(jīng)兩組組間差異性檢驗,P值均大于0.05。3.選取的88種應激相關(guān)基因在兩組的表達均不相同。組間表達差異倍數(shù)較大(絕對值2)的有25個,分別是HRH1、JUN、CCL2、HSPB7、HDAC5、HDAC6、CXCL2、HSPB2、EP300、CCR4、CXCL10、CCL7、CCL5、STAC、HDAC4、MAP2K7、CIDEB、IL9、IL13、IL5、IL1A、CD40LG、HSPB3、SCARA5、FOS;差異表達有統(tǒng)計學意義(P0.1)的基因共有13個,分別是CCL2、CECPB、IL1A、IL13、CD40LG、MAPK1、IL1B、LIG1、CCL7、TAF1、DGKK、CXCL1、CCR2。表達差異倍數(shù)較大且有統(tǒng)計學意義的基因共有5種,分別是CCL2、CCL7、IL1A、IL13、CD40LG。4.將13種組間有顯著性差異表達(P0.1)的基因加入數(shù)據(jù)庫進行GO term富集分析,結(jié)果顯示,這13種基因的主要功能體現(xiàn)在四個層面:一是對細胞因子活性、免疫應答和損傷應答的調(diào)節(jié),對應的基因為CXCL1,CCL2,CD40LG,CCR2,IL1B,IL1A,CCL7;二是對大分子合成的正向調(diào)節(jié)和大分子代謝過程的正向調(diào)節(jié),對應的基因為MAPK1、TAF1、CEBPB、CD40LG、IL1B、IL1A;三是調(diào)控細胞增殖,對應的基因為CEBPB、CCL2、CD40LG、IL1B;四是對胞外空間的調(diào)節(jié),對應的基因為CXCL1、CCL2、CD40LG、IL1B、IL1A、CCL7。結(jié)論:1.本實驗所選內(nèi)參照基因穩(wěn)定性好,這與本課題前期實驗結(jié)果相吻合。2.88種應激相關(guān)基因在兩組的表達均不相同。其中,非典型溺死組與典型溺死組對比表達差異較大(絕對值2)的基因有25種,兩組對比差異表達有統(tǒng)計學意義(P0.1)的基因共13種,這說明干性溺死與典型溺死兩種死亡過程有不同的應激反應機制。3.以CCL2為代表的CCL家族基因和IL家族基因在典型溺死與非典型溺死兩種類型死亡大鼠肺組織內(nèi)的表達均有較大差異,是鑒別非典型溺死的有效生物標志物。4.研究結(jié)果提示我們,在接下來實驗中應對CCL家族基因和IL家族基因進行深入的研究并擴大樣本和應激基因庫內(nèi)其他應激基因的再篩選,最終推廣到人類溺死尸體的法醫(yī)學死因鑒定應用中。
【關(guān)鍵詞】：非典型溺死 典型溺死 應激相關(guān)基因 CCL家族 實時熒光定量RT-PCR
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：D919
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-15
• 1 材料與方法15-18
• 1.1 主要試劑與儀器15
• 1.2 研究對象15
• 1.3 實驗方法15-17
• 1.4 統(tǒng)計學處理17-18
• 2 結(jié)果18-26
• 2.1 模型制備情況及大鼠尸體征象18
• 2.2 8 只大鼠樣本中88個應激相關(guān)基因的表達聚類分析結(jié)果18
• 2.3 管家基因Real-time PCR結(jié)果18-19
• 2.4 目標基因Real-time PCR結(jié)果19-22
• 2.5 13 種差異表達有意義基因的GO富集分析和Pathway富集分析結(jié)果22-26
• 3 討論26-32
• 3.1 非典型溺死大鼠模型的建立及驗證26
• 3.2 管家基因的穩(wěn)定性及應激相關(guān)基因的可能調(diào)節(jié)機制26-28
• 3.3 CCL家族與IL家族在溺死應激中的可能作用機制及其研究現(xiàn)狀28-31
• 3.4 本次實驗的局限性及進一步研究方向31-32
• 4 結(jié)論32-34
• 參考文獻34-37
• 綜述37-43
• 參考文獻42-43
• 致謝43-44
• 在學期間承擔/參與的科研課題與研究成果44-45
• 個人簡歷45

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：不同溺死類型大鼠肺組織中應激相關(guān)基因的表達水平研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：321152