【摘要】： 目的:彌漫性軸索損傷(diffuse axonal injury,DAI)是指在頭部遭受直線加速性或(和)旋轉(zhuǎn)性暴力打擊時(shí),腦組織由于加速運(yùn)動(dòng)而產(chǎn)生剪切、伸展和壓縮應(yīng)力,導(dǎo)致腦白質(zhì)廣泛發(fā)生以神經(jīng)軸索損傷為特征的一系列病理生理變化。意識(shí)障礙是其典型的表現(xiàn),臨床診斷較困難,預(yù)后多差。近年來研究發(fā)現(xiàn),彌漫性軸索損傷造成外傷后的腦功能障礙不僅是由于最初的機(jī)械外力對(duì)組織的剪切、積壓等造成的,更是由于損傷后數(shù)小時(shí)甚至數(shù)天中發(fā)生的復(fù)雜的“二次打擊”造成的。以往的研究主要集中在損傷后神經(jīng)元的變化,近年有研究發(fā)現(xiàn)外傷性腦損傷(traumic brain injury,TBI)后中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的小膠質(zhì)細(xì)胞增生,且隨時(shí)間的變化而變化。 有研究表明,小膠質(zhì)細(xì)胞是第一個(gè)針對(duì)損傷發(fā)生應(yīng)答的細(xì)胞。在短暫性前腦缺血模型中,發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞的反應(yīng)早在20分鐘內(nèi)即發(fā)生�；罨男∧z質(zhì)細(xì)胞可出現(xiàn)“呼吸爆發(fā)現(xiàn)象”,產(chǎn)生數(shù)量驚人的自由基,引起脂質(zhì)過氧化,還可引起細(xì)胞成分脂質(zhì)、蛋白之間相互交聯(lián),損傷神經(jīng)元功能。然而DAI后小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的氧化損傷是否參與神經(jīng)元的遲發(fā)性進(jìn)行性損傷尚未見報(bào)道。 本實(shí)驗(yàn)采用Marmarou A等人于1994年首次報(bào)道的自由落體撞擊方法復(fù)制大鼠DAI模型,觀察小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng),進(jìn)一步探討DAI后的神經(jīng)組織中神經(jīng)軸索和小膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用,為進(jìn)一步闡明DAI的病理生理學(xué)機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 方法:健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠55只,體重260±21g,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假手術(shù)組和損傷組(包括:30min、1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h和7d)。正常對(duì)照組大鼠不作處理;假手術(shù)組大鼠給予手術(shù)及打擊前處理,但不予真正的打擊;損傷組大鼠經(jīng)過手術(shù)后,給予打擊,打擊后按不同時(shí)間處死。觀察打擊后大鼠的行為學(xué)表現(xiàn),麻醉灌注后取全腦,制作石蠟切片,采用HE染色和硝酸銀銀染色的方法觀察大鼠腦組織的病理改變。將經(jīng)以上方法驗(yàn)證符合標(biāo)準(zhǔn)的大鼠列入損傷組,用免疫組織化學(xué)的方法測(cè)定腦組織中腦干損傷區(qū)nNOS、iNOS及COX-2表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。 計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示,用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,各組均數(shù)的比較行單因素方差分析(ANOVA),用最小顯著差法(LSD)作兩兩比較,P0.05為有顯著性差異。 結(jié)果:1組織病理學(xué)觀察: HE染色形態(tài)學(xué)變化:正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組的大鼠腦組織結(jié)構(gòu)清晰,無充血水腫及其它病理學(xué)改變;損傷組大鼠腦干部位組織充血水腫,變性壞死,24h達(dá)高峰,48h以后水腫有所減輕。 Bielschowsky’s鍍銀染色軸索的形態(tài)學(xué)變化:正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組的大鼠腦組織結(jié)構(gòu)清晰,軸索排列整齊,表面光滑;損傷組大鼠打擊后12h可見腦干部位神經(jīng)軸索扭曲、腫脹,呈串珠狀、波浪樣改變,收縮球形成,上述表現(xiàn)于48h及72h更加明顯,7d明顯好轉(zhuǎn)。 2 DAI后腦干β-APP的表達(dá):正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組大鼠腦干β-APP有弱的表達(dá)。損傷組48h及72h的β-APP表達(dá)量增高,受損軸索直徑增大,在斷裂的軸索周圍可見大量小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)。 3 DAI后腦干CD11b的表達(dá):正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組大鼠腦干區(qū)域少量淡染的CD11b陽性細(xì)胞,呈棕黃色、分枝狀,胞體小;損傷組活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯增加,突起變短、變粗,胞體增大、變圓,染色加深,主要分布于損傷軸索及小血管的周圍。 4 DAI后腦干nNOS的表達(dá):正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組大鼠腦組織nNOS陽性神經(jīng)元細(xì)胞淡染,呈棕黃色;損傷組大鼠打擊后30min即可見nNOS表達(dá)升高,主要分布于損傷軸索區(qū)域的神經(jīng)核團(tuán),且與對(duì)照組有明顯差異(P0.05),其表達(dá)量12h至24h達(dá)到峰值, nNOS表達(dá)于24h后開始下降,72h后明顯低于12h組,但與對(duì)照組仍然有明顯的差異(P0.05)。 5 DAI后腦干iNOS的表達(dá):正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組腦干組織小膠質(zhì)細(xì)胞iNOS弱表達(dá);損傷組30min即可見軸索損傷區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞iNOS表達(dá)的升高,與對(duì)照組有明顯差異(P0.05),72h表達(dá)量增高達(dá)到峰值,7d表達(dá)開始下降,較24h有非常明顯的降低,但較對(duì)照組仍有明顯的差異(P0.05)。 6 DAI后腦干的表達(dá):正常對(duì)照組與假手術(shù)對(duì)照組腦干組織COX-2弱表達(dá);損傷組30min即可見軸索損傷區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞及神經(jīng)元COX-2表達(dá)升高,與對(duì)照組有明顯差異(P0.05),24h表達(dá)量增高達(dá)到峰值,COX-2表達(dá)于24h后開始下降,但與對(duì)照組仍然有明顯的差異(P0.05)。 結(jié)論: 1、利用Marmarou A的方法成功復(fù)制了DAI模型。 2、觀察到DAI后小膠質(zhì)細(xì)胞大量表達(dá)iNOS、COX-2,可能對(duì)繼發(fā)的氧化應(yīng)激損傷起關(guān)鍵作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：D919

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本文編號(hào)：2256504