發(fā)布時間：2018-01-28 20:40

  本文關鍵詞： 免疫組織化學 E-選擇素 皮膚切傷 死后穩(wěn)定性　出處：《重慶醫(yī)科大學》2009年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 研究背景及目的:皮膚作為人體最大的器官,與外界直接接觸,對機體具有重要的屏障和保護作用,其最易遭受機械性損傷.在法醫(yī)學實踐中,皮膚損傷時間的推斷常是法醫(yī)工作者需要解決的關鍵問題。正因為如此,關于皮膚損傷時間推斷方面的研究,一直以來是國內外法醫(yī)病理學者的研究熱點問題之一。E-選擇素是細胞粘附分子(adhesion molecule,AM)中選擇素家族(selectin family,SF)成員之一。在體內分布非常局限,主要由毛細血管、后微靜脈的內皮細胞分泌,其胞內無儲存。它只在外傷、炎癥等刺激后在血管內皮細胞表面表達,且具有特異性。E-選擇素產生后,參與記憶T淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞的聚集,以及內皮細胞增殖、遷移、管狀形成和毛細血管的生成,但最主要是介導血液中中性粒細胞粘附。E-選擇素參與損傷早期修復作用,目前國內外對E-選擇素的研究多側重于臨床方面,而對于它在法醫(yī)學領域方面對皮膚損傷后不同時間的表達變化及死后穩(wěn)定性的研究甚少。尤其是國內對E-選擇素在皮膚機械性損傷修復時間的推斷方面幾乎未見報道。本研究通過建立大鼠皮膚切創(chuàng)損傷模型,運用免疫組化技術及其陽性細胞計數(shù)法對損傷組織進行E-選擇素的檢測與分析,探討在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中其表達的時序性變化規(guī)律,以及死后穩(wěn)定性狀況,有可能為法醫(yī)病理學皮膚損傷時間的推斷,鑒別生前傷和死后傷提供一個新的理論依據(jù)。 方法:采用完全隨機分組方法,分為實驗組和對照組。實驗組又分為生前造創(chuàng)組、死后造創(chuàng)組、死后穩(wěn)定性-20℃和25℃組。根據(jù)造創(chuàng)后處死時間不同,將實驗大鼠隨機分為傷后30min、1h、2h、3h、5h、7h、9h、12h、1d、3d、5d、7d共12亞組;死后造創(chuàng)組分為0.5h,1h,3h共3亞組;另設一組為正常對照組,即未造創(chuàng)組。生前造創(chuàng)組在大鼠頭部制做全層切創(chuàng),在預定時間分別頸椎脫臼法處死后即刻取材;死后造創(chuàng)組于處死大鼠后在預定時間造創(chuàng)取材。死后穩(wěn)定性組中將大鼠造創(chuàng)后于1d將它們頸椎脫臼法處死。隨機分為14亞組,其中9亞組置于-20℃環(huán)境中,于6h、12h和1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d取材;另5亞置于25℃環(huán)境中,于6h、12h和1d、2d、3d取材。取材皮膚組織用多聚甲醛-PBS液中固定后,石蠟包埋切片,進行常規(guī)HE染色光鏡觀察;采用免疫組織化學染色法進行E-選擇素染色,采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。 結果:1、HE染色觀察:傷后1h,創(chuàng)口周圍毛細血管擴張、充血,組織間水腫;傷后12h內,可見大量炎性細胞游出,主要以中性粒細胞浸潤為主;傷后1～3d,肉芽組織逐漸形成并大量增生,炎性細胞以單核-巨噬細胞為主;傷后5～7d,肉芽組織成熟,成纖維細胞生成,炎性細胞消失,創(chuàng)口基本愈合。死后造創(chuàng)組及正常對照組鏡下無上述改變。死后在-20℃下6小時至7d,皮膚損傷部位組織結構與斷頸處死即刻基本一樣,沒有發(fā)生明顯變化,在第6、7d可見其內極少數(shù)炎癥細胞結構欠清晰,核固縮、粹裂,但邊緣、組織結構較清楚;在25℃下,皮膚損傷部位組織中炎癥細胞、部分組織細胞逐漸自溶;以至損傷邊緣結構模糊不清。2、免疫組織化學SABC法染色觀察:傷后1h,創(chuàng)緣周圍毛細血管內皮細胞可見棕黃色陽性表達,以后持續(xù)升高,至傷后1d,陽性表達達到高峰;以后表達逐漸減弱,至傷后7d,仍可見有少量陽性表達。-20℃死穩(wěn)定性組中,不同時間陽性表達與傷后1d處死即刻沒有明顯變化;25℃環(huán)境中,隨著時間延長,組織及細胞的自溶,各亞組的表達情況與傷后1d處死即刻有明顯變化,陽性表達逐漸減少,在2d時未見表達。在正常對照組及死后傷組中均未見E-選擇素表達。3、陽性細胞計數(shù)法結果:陽性細胞率(PR值)在傷后1h到傷后1d逐漸上升,傷后1d達到高峰,傷后3d～7d,PR值逐漸下降。4、統(tǒng)計學處理結果:方差分析結果表明生前創(chuàng)傷各相鄰兩組之間E-選擇素PR值相比均具有顯著差異(P0.01)。其中生前創(chuàng)傷1d組與其他各時間組相比均有顯著差異(P0.01)。 結論:大鼠皮膚切創(chuàng)后E-選擇素可迅速增量表達,且與時間相關,呈一定規(guī)律性,呈上升-高峰-下降的時序變化;在傷后1d達到高峰。E選擇素在生前及死后均不表達,選擇素在皮膚創(chuàng)傷后表達的時序性變化規(guī)律并具有特異性,有望作為皮膚損傷發(fā)生后個體存活時間推斷的一個客觀有效的指標。且在死后E選擇素表達穩(wěn)定性與否受溫度影響很大,在-20℃下,其穩(wěn)定性好,但在25℃環(huán)境中,其穩(wěn)定性差。
[Abstract]:Background and purpose: the skin is the largest organ in the body, direct contact with the outside world, with a barrier and an important protective effect on the body, the most vulnerable to mechanical injury. In forensic practice, skin injury time estimation is often the key issues of forensic practitioners need to solve. Because of this, the research on the skin the time of injury, has been a research focus at home and abroad scholars of forensic pathology.E- selectin is a cell adhesion molecule (adhesion, molecule, AM) in the selectin family (selectin family, SF). A member of the in vivo distribution is very limited, mainly composed of capillaries, venules of endothelial cell secretion. No storage in the cells. It is only after trauma, inflammation stimulated expression in vascular endothelial cells, and the specificity of.E- selectin was produced, in memory T cells, monocytes, eosinophils Neutrophils and basophils aggregation, and endothelial cell proliferation, migration, tube formation and capillary formation, but the most important is mediated by blood neutrophil adhesion.E- selectin is involved in the repair of early damage, both at home and abroad on the study of E- focused on the clinical aspects, and to learn it in the field of forensic Research on expression and death in different time after skin injury after stability is little. Especially for the domestic E- selectin in time to repair the skin mechanical injury that was rarely reported. This study established a rat skin wound injury model, using immunohistochemical technique and positive cell counting method E- choice of detection and Analysis on tissue injury, to investigate the healing time regularity of its expression in the process of skin wound, and after the death of stability condition, are possible for the method A new theoretical basis is provided to identify the time of pathological skin injury and to differentiate between pre - and postmortem injuries.
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本文編號：1471509